外周血特异性肿瘤标志物mrna表达在非小细胞肺癌微转移研究中的意义

《外周血特异性肿瘤标志物mrna表达在非小细胞肺癌微转移研究中的意义》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、·2386·广东医学2010年9月第31卷第l8期GuangdongMedicalJournalSep．2010，Vo1．31，No．18外周血特异性肿瘤标志物mRNA表达在非小细胞肺癌微转移研究中的意义米路中，戚丽，李贵新，杨兆禄，杨金平潍坊医学院附属医院肿瘤科(山东潍坊261031)【摘要】目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血肿瘤标记物mRNA表达及联合检测的临床意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)检测47例NSCLC患者，26例肺良性疾病患者及13例健康对照者外周血细胞角蛋白19(CK19)、癌胚抗原(CEA)、黏蛋白一1(MUCI)、肺特异性x基因(

2、LUNX)mRNA的表达，分析它们作为NSCLC患者微转移标志物与病理类型、分化程度、临床分期的关系。结果47例NSCLC患者外周血中CK19、CEA、MUC1、LUNXmRNA的阳性率分别为38．3％、44．7％、61．7％、57．4％；在良性肺疾病患者阳性率分别为3．8％、l1．5％、0．0％、0．0％；健康组的外周血中没有四者的表达，差异有显著性；NSCLC组外周血CK19、MUCl、LUNXmRNA阳性表达率在鳞癌和腺癌患者比较差异无显著性，而腺癌患者与鳞癌患者中的CEAmRNA阳性率相比差异有显著性；MUC1、LUNXmRNA阳性率随分化程度升高而降低，差异有显著性，

3、而CK19、CEAmR—NA与肿瘤分化程度没有相关性；随着临床分期的加重，CKI9、CEA、MUC1、LUNXmRNA阳性率均增高，而且，MUC1、LUNXmRNA阳性率差异有显著性。结论(1)CEAmRNA在肺腺癌中的表达明显高于肺鳞癌，说明其对判断病理类型有一定意义；(2)MUC1、LUNXmRNA表达阳性率随TNM分期的增高而增加，随细胞分化程度的升高而降低。【关键词】非小细胞肺癌；微转移；肿瘤标志物；mRNA近几年非小细胞肺癌(non—smallcelllungcancer，1．2方法所有人组人员均空腹抽取外周静脉血NSCLC)远处转移及局部复发是治疗失败的主要原4mL

4、，置于EDTA抗凝管，按Trizol试剂盒说明溶解细因⋯。研究证实，微转移的存在是易复发和转移的预胞抽提总RNA，总RNA于紫外分光光度定量和1．5％后指征。设计NSCLC微转移更加精细的检测方法琼脂糖凝胶电泳分析鉴定其质量后，转入一80~C保存可以进行分子生物学诊断和分期，对进一步评估患者备用。预后、指导在肿瘤可能转移的早期进行干预及肿瘤监1．2．1引物设计如表1所示。控等方面具有重要意义。。因此，本研究设计以敏感表1引物设计性较高的RT—PCR法检测NSCLC患者外周血中组mRNA引物序列产物长度(bp)织特异性基因或组织特异性蛋白mRNA的表达情况，分析它们作为NSCLC

5、微转移标志物与肿瘤类型、癌细胞分化程度、临床分期的关系。1资料与方法1．1一般资料自2007年9月至2009年9月在潍坊医学院附属医院住院的I～Ⅲ期NSCLC患者47例，均为未作过任何抗肿瘤治疗的新发初治病例，并筛除其他肿瘤肺部转移。患者均经病理组织学(纤维支气管镜活检、经皮肺穿刺活检、经皮淋巴结穿刺活检)确诊NSCLC，其中鳞癌26例、腺癌21例。通过胸片、胸部CT、骨同位素扫描、B超、头部MR等或直接进行PET—CT进行临床分期，参考2002年美国癌症分类委1．2．2RT—PCR方法取RNA4加入到如下反员会和国际抗癌联盟制定的TNM分期标准，其中I期应体系中：Random

6、primer2L(500g／mL)，5×反转l5例，Ⅱ期19例，Ⅲ期l3例。录Buffer4L，2．5mmol／LdNTP4L，M—MuLV反转选取同期住院26例肺良性疾病患者作为肺良性录酶0．5(200U／wE)，RNA酶抑制剂0．5(30病变对照组，同时为评测实验结果的稳定性，另选取我u／)，加DEPC处理过的水至总体积20L，37℃下院查体健康人的外周血标本共13例作为健康对照组。孵育1h，95~C灭活5min。取3逆转录混合物，加潍坊医学院青年教师科研启动基金(编号：KQ2007003)入DEPC处理过的水13．5L，2．5mmol／LdNTP2L，广东医学2010年9

7、月第31卷第l8期GuangdongMedicalJournalSep．2010，Vo1．31，No．18·2387·MgC122L(25mlT1)，10XBuffer2．5L，Taq酶0．5表3各组外周血肿瘤标记手mRNA与肺癌组织学类型的关系例(％)，上下游引物各0．75IxL(10txm)，总反应体系为25L，加2OL石蜡油防止挥发。PCR反应程序为：95预变性5min，94oc变性45s，55℃复性45s，72~C延伸1min，循环35次，最后72℃补延伸7min结束反应。2．3各组