血凝抑制试验的影响因素

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1、畜牧兽医峻睛防治血凝抑制试验的影响因素张益鸣(辽宁省沈阳市于洪区动物疫病预防控制中心，辽宁沈阳110141)中图分类号$854．4+3文献标识码A文章编号1672—9692(2010)07—0040—02血凝抑制试验可用于测定免疫抗体效价、辅除非特异性现象，对血清的处理非常麻烦，不适助诊断病毒性疾病等方面，在基层工作中微量血合在大生产中推广。经一些试验证明，用鸡、凝抑制试验(HI)最常用于新城疫、禽流感等免疫鸭、鹅、鸽的红细胞悬液分别来检测鸡、鸭、抗体的检测。尽管此法操作简便、快速、准确、鹅、鸽的禽流感H5的

2、HI抗体时，非特异凝集实用，但在实践中也常常由于某些因素的影响，作用消除了。因此，在以HI试验检测家禽的禽从而使试验结果不精确，有时甚至无法判定结流感抗体的试验中最好使用同种非免疫家禽的红果。下面笔者就试验中遇到的问题及采取的解决细胞悬液。方法总结如下，希望与大家共同探讨。1．2由于不同个体鸡只红细胞对病毒的敏感性1不同来源的红细胞对试验结果也有很大不同从而影响HI效价，所以一般需要采取3只影响以上公鸡红细胞混合一起用，最好用非免疫公1．1在禽流感的HI试验中，用鸡的红细胞悬液鸡，如果用免疫公鸡代替，需增加洗

3、涤次数和时来检测鸡禽流感H5的HI抗体时，没有出现非间。特异性的凝集反应；而用鸡的红细胞悬液来检测2被检血清腐败变性鸭、鹅、鸽的禽流感H5的HI，特别是鸭、鹅非被检血清腐败变性严重影响免疫抗体检测。特异性的凝集反应明显。经查资料，禽血清中都因此，血样采集后要及时分离血清，分离后及时有低的或无法检测到的非特异因子，特别是水禽测定或放置在4℃冰箱内保存，要力求新鲜，如血清对鸡红细胞可能产生非特异性的凝集。若消暂时不测定可冷冻保存。血清使用前要充分摇匀。[收稿日期]2010-06-12序时，除用冻干苗外，还必须结合

4、使用油乳剂灭变、噪音、断喙、转群等会使鸡群产生严重的应活苗，使鸡群在整个饲养周期内对新城疫始终保激反应。持高度、持久、一致的抗体水平。根据当地新城4．4严格卫生消毒，防止病原体侵入鸡体单纯疫的流行特点制定免疫程序，采用病毒含量较高的疫苗免疫绝不能阻止NDV进入鸡群，更不能并且含有当时流行株的新城疫疫苗进行免疫，加消灭鸡群中已存在的NDV。因此，要注重鸡场强免疫操作，促进抗体的产生和维持。的环境卫生，建立定期消毒制度，包括带鸡消4．2选择优质疫苗把好疫苗质量关，采用正毒，定期对鸡舍内外环境、用具消毒等。饲养人确

5、方法使用疫苗，确保免疫效果。员进入鸡舍前要洗澡、更衣、换鞋。勤换垫料，4．3坚强饲养管理注意鸡舍的温度、湿度、及时清除粪便，注意病、死鸡的处理，消灭传染通风，严格控制室内有害气体的浓度，控制饲养源，切断传播途径。密度。减少舍温、饲料成分和喂养方式的突然改；0I2010．07畜牧兽医峻病防治3稀释液pH值对⋯试验值的影响细胞，适当配置，避免因多配而引起浪费。用pH值为5．0～8．0的系列磷酸盐缓冲液，7结果出现慢分别作HA和HI试验时的稀释液。有试验结果在环境温度2O～25℃，经过20～30min即可表明，稀释

6、液pH值5．8以下时，红细胞会发生读出抗原效价和血清抗体滴度。当温度过低，如自凝；pH值7．8以上时，图形洗脱加快，易造成低于15℃时，出现结果就要慢，往往需要超过观察误差；以pH7．0时，红细胞沉降最充分，40min才能出现清晰的结果。因此，为了在较短图形最清晰，HA值最小，HI值最大。的时间内出现结果，应将试验中的环境温度控制4病毒悬液和红细胞悬液在使用前没有摇在20～25℃，冬、春季可放入相应温度的恒温培匀养箱进行反应。病毒悬液和红细胞悬液如没有摇匀，加入时8结果出现快，并且整板无凝集现象浓度高低不一，

7、会人为造成误差。因此，抗原和试验过程中的环境温度超过3O℃时，试验红细胞使用前一定要摇匀，保证每一孔中加入的结果出现得要快。往往在15min左右就可读数。浓度准确一致。一旦时问过长，结果就会消失，使整板无凝集现54个血凝单位(HAU)抗原配制不准确象，给人一种误以为效价为0，或抗体滴度为4个HAU抗原要现用现配，混悬液要混匀，12log2。故要求试验环境温度不得超过30℃，配好的抗原室温下放置不得超过4h，不可反复反应2O～30min及时读数，不可长时间拖延读数冻融。为防止4个HAU抗原配制不准确，在作时间。

8、HI试验前必须做4单位抗原校正。用微量移液9泪滴状流淌(完全血凝抑制)线细器向反应板的第2孔至第5孔加生理盐水25l，一般是由于环境温度低，或是反应作用时间第1孔不加。用微量移液器吸取4单位抗原251短，结果还没有完全显示。需静置一段时间后再分别加入第1孔、第2孔中，从第2孔开始挤压读数。此时，亦可用恒温培养箱来控制温度和时4～6次混合，然后吸出25l至第3孔，依次倍问，以保证试验的正常进行。比稀释