[精品]动物细胞大规模培养技术平台2.doc

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1、清华科技园动物细胞大规模培养公共技术平台主营业务（Tsinghuascienceparkanimaleel1large-scaleculturecommonalitytechplatformmainbusiness）（一）优化生物制品生产丁•艺（Optimizebio-productproducetechnics）1、提供哺乳动物细胞大规模高密度培养技术服务，优化、改进生物制品生产企业现有生产工艺，提高产量，降低成木。2、优化细胞培养基,提供个性化、低血•清和无血清培养基，减小由动物来源成分对制品质量和批间差影响、简化分离纯化手段

2、，提高生物制品的安全性和产率。3、对CIIO、BIIK21、Veto、NS0、二倍体等细胞进行大规模培养研究，提高细胞的表达率及生物制品的单位体积产品得率，降低综合成木。4、提高细胞密度的大规模培养技术，不新增厂房、转瓶机等设施（备），通过改进转瓶和培养基，大幅度提高细胞量，提高单位体积生物制品产量，降低产品综合成木。项目1——BHK21细胞的低血清培养（Tteml—BHK21celllowserumculture）小目的意义：・目前国口蹄疫疫苗生产企业在BHK21细胞培养过程屮均加入大量（8〜10%）的牛血清以及水解乳蛋白等动物

3、来源成分，由其带来的安全、质量、产量和成本等问题已突显。•采用低血清培养基培养BHK21细胞，牛血清添加量可降低至4%,细胞生长、增殖和病毒滴度与传统培养方法无差异。b）项目现状：采用低血清培养基添加4%新生牛血清，与MEM培养基添加10%新生牛血清培养BHK21细胞，比较:•在大方瓶里培养，驯化期（前6代）细胞长势较弱但形态良好，6代以后长势增强，传到18代起细胞状况良好。・细胞贴壁率及分裂百分率无明显并异，低血清培养基的细胞形态优于对照纽・口蹄疫病毒滴度与传统培养方法比较无明显差异。项目2——VERO细胞的低血清培养和反应器培

4、养（Item2—VEROcelllowserumanclbioreactorculture）R目的意义:•使用普通199培养基培养VERO细胞生产狂犬疫苗，新生牛血清添加量较大（约10%）,细胞密度较低，病毒滴度较低。b）项目现状：•采用低血清培养基在转瓶中培养VERO细胞，新生牛血清用量降至3%,病毒滴度提高至7.3以上。•低血清培养基用于反应器培养VERO细胞生产狂犬疫苗，牛血清用量降至3%,滴度可达9.0。项目3——BHK21细胞、VERO细胞和CHO细胞在三层3L转瓶屮的低血清高密度培养（Itcm3一BHK21&Vero&

5、CHOcelllowserumhighdensityculturein3Lof3-tierroll-bottle）a）目的意义：・国内绝大多疫苗企业使用转瓶生产，提高产量受到场地和设备空间限制。•使用多层转瓶结合低血清培养基进行细胞培养，可充分利用现有转瓶机，人幅度提高细胞密度和单位体积生物制品产量，从而提高生产能力，降低生物制品综合成本。b）项目现状：•采用3L三层转瓶和低血清培养基培养BIIK21细胞和VERO细胞，新生牛血清添加量3%,细胞密度均比单层转瓶培养提高200%。例：疫苗生产企业如需扩产，采用此办法可不再进行厂房设

6、备等固定资产投资。•CH0细胞在3L三层转瓶屮低血清高密度、高维持培养：生产EP0,提高细胞密度，提高表达量；生产重组CHO细胞乙肝疫苗，低血清高密度培养，细胞维持2个月不脱落。项目4二倍体细胞（2BS）培养技术（Item4一Diploic!cell,2BSculturetechnique）a）目的意义:・发达国家多采用人二倍体细胞生产狂犬疫苗，疫苗具有较好的安全性，但产量较低。・目前国内二倍体细胞主要用于中肝、水痘等疫苗生产，因其传代次数很有限，细胞密度低、表达低，疫苗产量受到限制。b）项目现状：•利用所研制的二倍体（2BS）细

7、胞专用培养基添加10%新生牛血清对2BS细胞连续传代，经过3代驯化，细胞生长良好，镜下观察细胞干净，黑点少，优于L1水的MEM培养基。（二）生物制品新药研发和新工艺研发（Newdrugandproducetechnicsresearch）利用动物细胞大规模培养技术优势，开发新型疫苗（生物制品）、以及生物制品生产新工艺：1、无血清无动物组分培养基反应器。2、高密度全悬浮培养。3、蛋白高效表达。项目1——BHK21细胞全悬浮培养技术和口蹄疫疫苗等（Iteml—BHK21cellfullsuspendculturetechniqucan

8、dfoot-and-mouthdiseaseetc.）a）目的意义:•使用BHK21细胞生产口蹄疫疫苗为胞内病变，细胞量（密度）成为疫苗产量的瓶颈。•无血清、高密度全悬浮培养BIIK21细胞生产口蹄疫疫苗，可以大幅度提高细胞密度和数量,避免动物来源