牦牛葡萄糖转运蛋白和单羧酸转运蛋白基因的克隆测序及在肌肉中的表达.pdf

《牦牛葡萄糖转运蛋白和单羧酸转运蛋白基因的克隆测序及在肌肉中的表达.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、江苏农业科学2014年第42卷第8期一29一金素钰，王国生，徐亚欧，等．牦牛葡萄糖转运蛋白和单羧酸转运蛋白基因的克隆测序及在肌肉中的表达[J]．江苏农业科学，2014，42(8)：29—31牦牛葡萄糖转运蛋白和单羧酸转运蛋白基因的克隆测序及在肌肉中的表达金素钰，王国生，徐亚欧，林亚秋，郑玉才(西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都610041)摘要：采用RT—PCR方法克隆九龙牦牛(Bosgrunniens)肌肉中葡萄糖转运蛋白(GLUT)和单羧酸转运蛋白(MCT)基因GLUT4、MCT1和MCT4的cDNA序列，并与普通牛(Bos把m)进行基因序列和肌肉中mRNA水平的比较，以探索牦牛适

2、应高原低氧的分子基础。结果表明，GLUT4、MCT1和MCT4的核苷酸序列和推导的氨基酸序列与普通牛的相似性均在99．5％以上。实时荧光定量PCR分析显示，成年九龙牦牛与黄牛背最长肌中GLUT4、MCT4基因mRNA水平无差别，而牦牛PMCT1基因mRNA水平显著低于黄牛(P<0．05)。乳酸脱氢酶(LDH)总活力和同工酶谱测定结果表明，牦牛背最长肌中LDH总活力、LDH5比例显著高于黄牛，显示出更强的无氧酵解能力。结合MCT1基因mRNA水平的差异发现，牦牛背最长肌对乳酸的氧化代谢能力低于黄牛，更倾向于无氧酵解，与其适应高原低氧有关。关键词：九龙牦牛；葡萄糖转运蛋白；单羧酸转运蛋白；肌肉；

3、低氧适应；基因表达中图分类号：$823．852文献标志码：A文章编号：1002—1302(2014)08—0029—03牦牛(Bosgrunniens)是青藏高原特有的牛种，对高寒、低1材料与方法氧等恶劣生态环境有良好的适应性。低氧环境能导致细胞多种能量代谢通路的适应性变化，例如无氧酵解增加，单位葡萄1．1试验动物及样品采集糖产生的能量减少，进而导致细胞膜葡萄糖转运蛋白试验所用九龙牦牛(Oosgrunniens)样品采自四川省甘孜(GLUT)适应性增加。肌肉组织中最重要的GLUT家族成员州九龙县，其中，0．5岁犊牛6头，3．5—5．5岁牦牛10头，7—包括GLUT1和GLUT4，其中GLUT

4、4是肌肉和脂肪细胞中的10岁牦牛8头。屠宰时，迅速采集背最长肌和股四头肌，用主要葡萄糖转运蛋白⋯，存在于细胞内，受胰岛素、运动和缺锡箔纸包好，置于液氮内带回实验室，一8O℃保存备用。另氧等因素影响。肌肉是产生乳酸的主要组织，氧化型肌外，从四川省青白江市某屠宰场采集6头成年黄牛背最长肌纤维(红肌)和心肌能以乳酸为燃料分子为机体提供能量。和股四头肌样本作为对照。在乳酸转运进入细胞的过程中，单羧酸转运蛋白(MCT)发挥1．2试剂及器材重要作用。MCT有多个家族成员，其中，在肌肉中表达的主主要仪器包括高速冷冻离心机(Et立)、超声波破碎仪要有MCT1、MCT2和MCT4，在乳酸转运中发挥功能。(So

5、nics)、分光光度计(Cary50，Varian)、电动匀浆器MCT1在氧化型纤维中表达水平高，被认为在乳酸向细胞内(PT一1200E，Kinematica)、凝胶成像系统(GelDoc2000，转运中发挥重要的作用。Jurie等研究表明，低氧适应能使Bio—Rad)。荧光定量PCR试剂SYBR~PremixExTaqTM肌肉组织在能量代谢方面更依赖于葡萄糖。因此，分析(2×)购自TaKaRa公司；反转录试剂盒购自MBI公司；GLUT、MCT基因序列及其组织表达规律，对认识动物低氧适2×LongTaqMix、Trizol试剂均购白天根公司。引物均由上海应的分子机制是重要的切人点。目前，关于

6、暂时性缺氧对英骏生物技术有限公司合成。GLUT、MCT基因表达影响的研究已有不少，但对于低氧驯化1．3牦牛GLUT4、MCTI和MCT4基因的克隆测序的牦牛组织中GLUT、MCT还未见报道。因此，试验假设长期取RNA8，用Randomhexamer引物按Fermentas反转的低氧适应可能导致牦牛GLUT、MCT基因序列或组织表达录试剂盒说明书进行反转录。根据GenBank中普通牛水平发生改变，重点分析九龙牦牛GLUT4、MCT1和MCT4的GLUT4、MCT1和MCT4基因mRNA序列(序列号依次为基因序列及其在肌肉中的表达特点，并与普通牛比较，以探索AY458600、BC104598和N

7、M一001109980)，用Primerpremier牦牛适应低氧环境的分子机制。5．0软件设计引物。GLUT4一F：5一CTAAGACAAGATGC．CGTCG一3。Z一R：5一TCAGrCATGCrCArCrGGC一3；MCT1一F：5一CGAGCCGCGTATAACGAT一3；MCT1一R：5一CCACAGGTTCAAACTGGACTCT一3．MCT4一F：5一CTY-收稿日期：2013—11—07GG