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1、第31卷第4期西北农林科技大学学报(自然科学版)Vol.31No.42003年8月Jour.ofNorthwestSci2TechUniv.ofAgri.andFor.(Nat.Sci.Ed.)Aug.2003X犬细小病毒的分离与鉴定12孔庆波,张彦明(1公安部警犬技术学校,辽宁沈阳110034;2西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨陵712100)[摘要]从临床表现体温升高、呕吐、血样腹泻、脱水等疑似细小病毒(CanineParvovirus,CPV)感染的病犬中,采取粪样8份。应用狗肾传代细胞(MDCK)增毒,其中6号病料(CPV6)在MDCK细胞上产生脱落、变形、
2、游离等细胞病变,且细胞感染性试验发现,CPV6对MDCK的感染性强于对猫肾传代细胞(CRFK)的感染性;核酸型试验证明,CPV6毒株的代谢可被52溴脱氧尿核苷(FUDR)所抑制,其核酸属于DNA型;所分离的病毒培养物能凝集68猪、猴、马、猫的红细胞,凝集效价达2～2,并能被已知犬细小病毒阳性血清所抑制,但不能凝集牛、犬、绵羊、兔、小鼠和鸡的红细胞;电镜观察病毒粒子外观呈圆形或六边形,直径约20～23nm;该病毒耐酸、耐热、耐乙醚;动物致病性试验表明,经口服1mL,试验组幼犬第7天发病,采集病犬粪样做HA试验为阳性反应,其凝集猪红细胞的特性能被犬细小病毒阳性血清所抑制。[
3、关键词]犬细小病毒;分离;鉴定+[中图分类号]S852.655[文献标识码]A[文章编号]167129387(2003)0420054205犬细小病毒(CPV)感染是犬的一种急性出血性该病才在各省频繁发生,故对该病的病原分离鉴定[1]肠炎或以急性心肌炎为主要表现的传染病。1977的方法研究还不多,虽也建立了某些快速、敏感和特年,美国人Eugster从1条患出血性肠炎的病犬粪异的检测方法,但还不适合兽医临床应用和推[7～9]便中首先发现了犬细小病毒颗粒,当时美国许多地广。本文通过试验证明了辽宁某地区犬细小病方的犬暴发了急性腹泻。随后,该病毒在加拿大、澳毒的存在和流行,以期
4、为兽医临床工作者提供判断[2～4]大利亚及欧洲某些国家被证实。1979年以来,依据,建立一种简便、经济、实用而可靠的病原分离在我国北京、南京、上海、哈尔滨、长春、南昌、昆明等鉴定方法。现将试验结果报道如下。地的军、警犬场和实验动物场犬群中也不断流行一1材料与方法种以出血性腹泻为特征的传染病,幼犬发病率高达90%以上,致死率达30%～100%,造成巨大损失,1.1材料给我国军警犬业及民间的养犬业带来严重威胁。被检病料从沈阳某犬场临床表现有体温升1982年10月,我国报道在暴发传染性出血性腹泻高、呕吐、血样腹泻、脱水等症状的疑似犬细小病毒的病犬粪便提取物中发现细小病毒颗粒,
5、其大小和的病例中,采集粪样8份。形态结构具有典型的细小病毒特征,从而首次证实材料CPV阳性血清(血凝抑制效价为[5,6]12该病在我国的存在。随后,在我国各地陆续有本2)、CPV弱毒苗(定名为A2CPV)、狗肾传代细胞病发生的报道。(MDCK)和猫肾传代细胞(CRFK)由长春解放军农该病在全国的流行对养犬业造成极大危害,已牧大学犬病研究中心提供。成为犬的一种重要的传染病。因此,该病的防治亦成红细胞分别采集猪、马、猴、猫、牛、绵羊、兔、为我国养犬业所面临的一个严重问题。实用、准确而犬、小鼠和鸡抗凝的血液,洗涤后配成0.5%红细胞迅速的病原分离鉴定已成为预防和治疗该病的重要
6、悬液备用。措施。在世界范围内,迄今人们已建立了多种用于犬试验动物从某养犬场购回6只1.5月龄同1细小病毒分离鉴定的方法,但在我国,由于最近几年窝、未免疫幼犬,CPVHI抗体均小于2,观察饲养4X[收稿日期]2003201215[基金项目]公安部警犬疾病项目(GA1996003)[作者简介]孔庆波(1969-),男,辽宁本溪人,讲师,在读博士,主要从事犬病研究。[通讯作者]张彦明(1956-),男,陕西南郑人,教授,博士,博士生导师,主要从事预防兽医学研究。第4期孔庆波等:犬细小病毒的分离与鉴定55d,每天测体温2次,无任何异常,供本试验用。上述2种细胞株的感染性。仪器9
7、6孔V型微量血凝板由上海实验仪1.3病毒鉴定器一厂生产。1.3.1血凝试验(HA)参考文献[1,10]的方法细胞培养液MEM生长液先用MEM粉(美进行。国Gibco公司产品)按说明配成基础培养液,使用时1.3.2血凝抑制试验(HI)参考文献[1,10]的方按需要量配制,每100mL基础培养液中加入150法进行。mLöL犊牛血清(自制)10mL,30göL谷氨酰胺11.3.3红细胞凝集对比试验采用微量法,分别用mL,各10000IUömL青霉素、链霉素混合液1mL,pH6.4和7.2的PBS液,在4℃条件下测定分离毒用70göL碳酸氢钠溶液
