莪术醇酶联免疫检测方法（ELISA法）的建立-论文.pdf

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1、江苏农业学报(JiangsuofASci．)，2013，29(6)：1468～1471http：／／www．jsnyxb．C0m黄凤香，王娟，曾建红，等．莪术醇酶联免疫检测方法(ELISA法)的建立[J]．江苏农业学报，2013，29(6)：1468—1471doi：10．3969／j．issn．1000~O．2013．06．046莪术醇酶联免疫检测方法(ELISA法)的建立黄凤香，王娟，曾建红，侯艳芳，白准，陈旭(桂林医学院药学院，广西桂林541004)摘要：采用杂交瘤技术制备出莪术醇的单克隆抗体(Mab)，对莪术醇的酶联免疫吸附分析法(ELISA)进行线性、精密

2、度、重复性、加样回收率等方面的评价，并与气相色谱分析法(GC)进行比较。结果显示，酶联免疫吸附分析法的线性范围为0．16～11．00g／ml，重现性好，精密度高，平均加样回收率为102．78％，板间和板内差异均小于10．00％，最低检测限为0．078ml。用该方法测定广西莪术、温郁金中莪术醇含量，其检测结果与GC方法进行比较，二者的相关系数达到0．9728。由此可知，莪术醇的ELISA检测方法总体上符合免疫分析的要求。关键词：莪术醇；单克隆抗体；酶联免疫吸附分析法中图分类号：Q78文献标识码：A文章编号：10004~0(2013)06—1468~4Developme

3、ntofenzyme-linkedimmunoassayforcurcumolHUANGFeng-xiang，WANGJuan，ZENGJian—hong，HOUYah—fang，BAIZhun，CHENXu(SchoolofPharmaceutical，GuilinMedwalUniversity，Guilin541004，China)Abstract：Thecurcumolmonoclon~antibodypreparedbyhybridomatechniquewasusedforthedeterminationofcurcumolbyenzyme—linked

4、immunoassay(ELISA)．Theaccuracy，repeatability，andrecoveryofthemethodwasassessed．Themethodshowedgoodrepeatabilityandhighaceuray．Theaveragerecoverywas102．78％，andthelowestdetectionlim-itwas0．078tLg／m1．ThecontentsofeurcumolinCurcumakwangsiensiandCurcumawenyujindetectedbyELISAwaspos-itivelyc

5、orrelatedwiththosebygaschromatography(GC)，withacorrelationcoeficientof0．9728．TheresultssuggestedthatELISAmettherequirementsfordetectionofcurcumo1．Keywords：curcumol；monoclonalantibody；enzyme—linkedimmunoassay莪术醇(Curcumo1)是莪术挥发油中的重要法，有少部分强心苷类化合物采用生物效应强度成分，具有抗病毒和抗肿瘤生物学作用⋯。因莪的生物检测法。随着分析测试仪

6、器的快速发展，术醇在药材中的含量较低，与其他挥发性成分难越来越多的仪器分析方法应用到中药质量分析分离，使得检测难度比较大，且检测时间长。目领域。然而，仪器分析需要对样品进行复杂的前前，中药的质量评价方法多为物理、化学分析方处理，以排除干扰，而且仪器分析速度慢，检测环境条件要求严格，检测费用高。免疫分析方法由收稿日期：2013-06．13于其特异性强、前处理简单、反应速度快、检测费基金项目：国家自然科学基金资助项目(30960498)；广西自然科学用低廉，适于现场监控和大批量样品分析的特基金资助项目(2010GXNSFA013252)点而受到广泛的关注。抗体是免疫分析

7、的关作者简介：黄凤香(1975-)，女，实验师，研究方向为药物质量标准。键问题，对天然产物(多为小分子化合物)而言，(Te1)18707736975；(E—mail)huangfengxiang@glmc．edu．CR只要有相应的抗体，就可以用免疫分析法进行定通讯作者：陈旭，(E-mail)junxuxu@163．COB性和定量分析。国内外一些研究机构将免疫分黄凤香等：莪术醇酶联免疫检测方法(ELISA法)的建立析法应用于天然产物活性成分的分析研究，日本96孔聚苯乙烯酶标板，37℃孵育1h；②封闭：以已有甘草酸的免疫分析试剂盒面市。本试验在含0．05％吐温一20