高良姜叶枯病病原菌的分离和鉴定-论文.pdf

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1、安徽农业科学，JournalofAnhuiAS6．Sci．2014，42(16)：5031—5032责任编辑李占东责任校对李岩高良姜叶枯病病原菌的分离和鉴定陈旭玉，甘炳春，冯锦东(中国医学科学院＆北京协和医学院，药用植物研究所海南分所，海南省南药资源保护与开发重点实验室海南万宁571533)摘要[目的]明确高良姜叶枯病病原茵。[方法]病原菌从高良姜感病组织上分离并依据柯赫氏法则进行致病性测定，病原菌的鉴定主要通过形态鉴定和ITS序列分析。[结果]高良姜叶枯病病原茵确定为可可毛色二孢(Lasiodiplodiatheobromae)，属子囊菌门(Ascomy—cota)，

2、座囊菌纲(Dothideomycetes)，葡萄座腔菌目(Botryosphaeriales)，葡萄座腔菌科(Botryosphaeriaceae)，毛色二孢属(Lasiodiplodia)。[结论]首次报道高良姜叶枯病病原茵为可可毛色二孢。关键词高良姜；叶斑病；可可毛色二孢中图分类号S573文献标识码A文章编号0517—6611(2014)16—05031一【)2IsolationandIdentificationofthePathogenofLeafBlightofAl~niaofficinarunHanceCHENXu-yu，FENGJin-dongetal(Ha

3、inanProvincialKeyLaboratoryofResourcesConservationandDevelopmentofSouthernMedi-cine，HainanBranchInstituteofMedicinalPlant，ChineseAcademyofMedicalSciences＆PekingUnionMedicalCollege，Wanning，Hainan571533)Abstract[Objective]InordertoidentifythepathogencausingtheA．officinarunleafblightdisease

4、．[Method]ThepathogenwasisolatedandpurifiedfromtheinfectedA．officinarunaccordingtokochRule，anditspathogenicitytothehostwastested．ThepathogenwasidentifiedaccordingtoitscharactersandrDNAITSsequencesanalysis．[Result]ThepathogenwasidentifiedasLasiodiplodiatheobromae，belongedtoAscomycota，Dothi

5、deomyeetes，Botryosphaeriales，Botryosphaeriaeeae，Lasiodiplodia．【Conclusion]FirstreposedleafblightdiseaseonA．officinarunisL．theobromae．KeywordsAlpiniaoficinarun：IJeafblightdisease：Lasiodiplodiatheobromae高良姜(AlpiniaofficinarumHance)属姜科山姜属多年供测定。生草本植物，以根茎人药，是一种常见的南药⋯。其性热、1．2．2病原菌致病性测定。将菌株的菌丝块

6、分别接种于健味辛，具有温中、散寒、理气、止痛的功效。高良姜主产于康无病的叶片，采用刺伤的接种方法，接种后保湿。以接种广东、广西、福建、台湾、海南、云南等地，在海南陵水、万宁、无菌的琼脂块作为对照，逐日观察并记录其发病情况。儋州等都有栽培J。海南种植的几块高良姜基地都发现1．2．3病原菌形态学观察。将柯赫法则验证后的菌株在叶枯病，严重影响了高良姜的发展。发病的叶片多从叶尖PDA培养基上培养30d，观察菌落的颜色和形状，用显微镜叶缘开始发病，病斑近圆形或不规则形，灰褐色，干斑病斑观察分生孢子梗、分生孢子的形态。黄褐色，中央有灰白色，病健交界处有明显的黄色晕圈和较1．2．4病

7、原菌分子鉴定。使用TIANGEN生化科技有限公宽的褐色分界线。严重者整个叶片变黄干枯(图1)。目前司植物基因组试剂盒(DP320-02)进行真菌DNA提取，具体国内外尚未见对高良姜叶枯病的研究，为了明确叶枯病的步骤参照其说明书。以真菌DNA为模板，ITS1／ITS4为引物病原菌和有效控制叶枯病的蔓延，笔者对高良姜叶枯病病进行PCR扩增。其序列为：ITS1：5TCCGTAGGTGAACCT—原菌进行研究，旨在为高良姜叶枯病的防治提供理论依据。GCGG一3；ITS4：5TCCTCCGCTFATI"GATATGC一3。扩增反1材料与方法应体系为