检测污染兽用疫苗14种支原体PCR方法的建立及应用-论文.pdf

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1、第36卷第1期中国预防兽医学报Vo1．36．No．12014年1月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJan．2014doi：10．3969~．issn．1008—0589．2014．01．11检测污染兽用疫苗14种支原体PCR方法的建立及应用英聪1,2，王海光，刘灿，一，沈青春，毕丁仁，宁宜宝(1．中国兽医药品监察所，北京100081；2．华中农业大学，湖北武汉430070；3．中国农业大学，北京100193)摘要：为完善兽用疫苗中支原体污染的检测技术，本研究对污染生物制品的14种

2、常见支原体基因组进行分析，设计一对可以同时检测这14种支原体的通用引物，建立兽用疫苗中支原体污染的PCR检测方法。应用该方法对l0种兽用活疫苗的61批次和l0种细胞系的21份传代细胞样品进行支原体污染的检测，并与培养法、DNA荧光染色法及成品的支原体PCR检测试剂盒相比较，除成品的支原体PCR检测试剂盒的检测结果不同之外，其他3种方法的检测结果均相同。但培养法耗时长，DNA荧光染色法操作复杂，成品的支原体PCR检测试剂盒只能检测5种污染细胞的常见支原体，出现漏检情况，而本研究建立的PCR检测方法快速、准确，可以为今后兽用疫苗的支原体污

3、染检测工作提供参考。关键词：兽用疫苗；支原体污染；PCR检测中图分类号：$852．62文献标识码：A文章编号：1008—0589(2014)01—0042-04TheestablishmentofthePCRassayfordetectionof14kindsofMycoplasmacontaminationinveterinaryvaccinesYINGCong，WANGHai—guang，LIUCan，SHENQing-Chun，BIDing—ren，NINGYi—bao(1．ChinaInstituteofVeterinaryD

4、rugsControl，Beijing100081，China；2．HuazhongAgriculturalUniversity，Wuhan430070，China3．ChinaAgriculturalUniversity，Beijing100193，China)Abstract：Inthisstudy，basedonanalyzinggenomicsequencesof14kindsofMycoplasmastandardstrainswhichusuallycontaminatedinthebio—products，aPCRdet

5、ectingassaywasestablishedwithapairofuniversalprimerswhichwasabletodetectthose14Mycoplasmacontaminatedinveterinaryvaccines．Usingthismethod，wedetected61batchesof10veterinarylivevaccinesand21passagecellsof11celllines．ComparisonwiththebacteriacultureassayandDNAfluorescentst

6、ainingmethod，thedetectionresultswerethesame，butlessthanthecommercia1PCRkit．However．thecommercialPCRkitwasonlycapabletodetect5kindsofcommonMycoplasmascontaminatingcells．Otherwise，thecultureassaywastime—consumedandtheDNAfluorescentstainingmethodwassomehowcomplicated．Thees

7、tablishedPCRdetectingassayprovedtobespecificforthe14kindsofMycoplasmawhichprovidedusefultechniqueforMycoplasmadetectioninveterinaryvaccines．Keywords：veterinaryvaccine；Mycoplasmacontamination；PCR支原体(Mycoplasma)5L称霉形体，大小介于细原体结构简单、个体微小，呈高度多形性、能通过菌和病毒之间，是一类缺乏细胞壁、可以在无生命滤菌器(0

8、．22Ixm~0．45txm)，自1956年国外学者第培养基中生长增殖的最小的原核细胞型微生物。支一次检测到细胞培养物中存在支原体污染以来，这Correspondingauthor收稿日期：2013—03—13基金项目：