肿瘤细胞成瘤模型的建立与制片的体会-论文.pdf

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1、CHINESEJ0URNAL0FANAT0MYV01．36No．62013解剖学杂志2013年第36卷第6期[37]GautamM，NoakesPG，MoscosoL，eta1．Defectiverialdysfunctionandneuromuscularjunctiondegeneration[J]．neuromuscularsynaptogenesisinagrin-deficientmutantmice[J]．FASEBJ，2010，24(5)：1376—1390．Cell，1996，85(4)：525—535．[4O]KostrominovaTY，PasykKA，VanRemmenH

2、，eta1．Adaptive[38]HarmannAging：atheorybasedonfreeradicalandradiationchangesinstructureofskeletalmusclesfromadultSodlchemistry[J]．JGerontol，1956，11(3)：298—300．homozygousknockoutmice[J]．CellTissueRes，2007，327(3)：[39]JangYC，LustgartenMS，LiuY，eta1．Increasedsuperoxidein595—605．vivoacceleratesage-associat

3、edmuscleatrophythroughmitochond-(编辑：刘芳)肿瘤细胞成瘤模型的建立与制片的体会唐岩毕振伍战军张宏权△(北京大学医学部基础医学院组织学与胚胎学教研室，北京1OO191)裸鼠体内成瘤实验是检验肿瘤细胞系成瘤能力的金标准，1．5转移模型通过培养肿瘤细胞株建立裸鼠荷瘤模型是研究肿瘤生长、转移BALWC裸鼠尾静脉注射：H1299、MCF-7稳转FERMT2细生物学特性及其分子调控机制，以及寻找治疗新药、新方法的重胞、1316细胞悬液；C57小鼠尾静脉注射：t316细胞悬液(表2)。要手段。目前用于建立模型的肿瘤细胞株种类较多，如大肠癌、1．6取材胃癌、宫颈癌、黑色素瘤、

4、卵巢癌、肺癌、乳腺癌、肾癌、鼻咽癌，但按照各组成瘤模型的成瘤时间取材(瘤组织)、转移模型取对不同成瘤模型的建立、成瘤特点、取材、固定及制片应注意的材时间取材(肺、肝)，于Bouin固定液中固定，48h后常规脱水、细节等报道较少。石蜡包埋，切片5／am，H～E染色观察。取C57小鼠B16转移模本实验采用生长旺盛的人非小细胞肺癌(H1299)、大肠癌型的股骨冲出骨髓进行涂片，瑞氏染色观察。(SW480、SW620、HCTll6)、乳腺癌(MCF-7稳转FERMT2细2结果胞)、卵巢癌(SKOV3)及小鼠黑色素瘤(B16)等肿瘤细胞株悬液通过皮下注射和静脉注射等方法建立裸鼠成瘤和转移模型，对2．1肿

5、瘤细胞株皮下注射成瘤情况成瘤及转移的时间、取材、固定、包埋、切片等进行优化和改进，各种细胞系成瘤时间及肿瘤大小各不相同(表1)，静脉注射旨在为开展此类相关研究提供参考。转移时间见表2。2．2H_E染色1材料和方法结果显示H1299成瘤组织内癌细胞呈均匀生长(图1A)；1．1动物SW480、SW62O、SWlll6成瘤组织内，癌细胞呈圆形或椭圆形生SPF级BALB／C裸鼠，4～6周龄，雌雄不限，(20±2)g，每长，其间由致密的结缔组织分隔(图1B、C、D)；MCF-7稳转组5只；C57小鼠，5周龄，雌雄不限，(20±2)g，每组5只，由北FERMT2细胞成瘤细胞生长迅速，其瘤组织中央有严重的出

6、血京大学医学部实验动物部提供。坏死及黏液变性区，并有大量的淋巴细胞浸润(图1E)；SKOV31．2试剂瘤组织内的癌细胞沿膜内周边生长，并分泌大量的浆液(图胎牛血清、RPMI-1640培养基、H—DMEM(HyClone公司)；1F)；B16瘤组织内的癌细胞呈均匀生长，并产生大量的黑色素常规脱水、包埋用乙醇、二甲苯、石蜡(北京化工厂产品)等，苏木颗粒，局部也有坏死和溃疡出现(图1O)在H1299转移模型的精、伊红及瑞氏染料(Sigma公司)。肺、肝组织中可见肿瘤细胞团出现；MCF-7稳转FERMT2细胞1．3肿瘤细胞的制备转移模型的肝中也有经血转移的肿瘤细胞团；用BALB／C裸鼠制备成瘤细胞悬液

7、：将生长旺盛、换液不超过12h的肿瘤作为B16转移的模型只出现肺转移，而用C57小鼠作为B16转细胞，离心洗去血清，用相应的培养液制成不同浓度的细胞悬液移的模型出现肺、肾、脾、淋巴结、骨骼肌及骨转移的多组织转(表1)。移，其中在骨转移的股骨中的骨髓涂片中基本未见正常骨髓结1．4成瘤实验构和细胞，取而代之的是大量的成团的黑色素细胞，细胞质内含将制备好的肿瘤细胞悬液注射到BALB／C裸鼠背部皮下，有黑