新型鸭呼肠孤病毒RT-PCR检测方法建立与初步应用-论文.pdf

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1、·24·试验研究广东畜牧兽医科技2014年(第39卷)第1期新型鸭呼肠孤病毒RT—PCR检测方法建立与初步应用孔丰，袁远华，肖成谋。，黄淑坚貅(1．遂溪县遂城畜牧兽医站，广东湛江524300；2．大沥镇农林服务中心，广东佛山528231；3．佛山科学技术学院生命科学学院，广东佛山528231)摘要：为建立一种能够快速检测新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)的方法，本研究参考GenBank上登录的NDRVs3基因保守序列设计特异性引物经条件优化后，建立了检测NDRV的RT-PCR方法。对其特异性、敏感性和重复性进行检验。结果显示：该方法仅能从NDRV分

2、离毒中扩增到与预期大小相符，长度为298bp的特异性目的片段，检测灵敏度达到83．4Pg病毒RNA；而其它病毒：番鸭呼肠孤病毒、禽呼肠孤病毒、鸭病毒性肝炎病毒、鸭瘟病毒、鸭新城疫病毒和禽流感病毒等样品的扩增结果均为阴性。采用该方法对在广东不同地区采集的15份鸭病料样品进行检测，NDRV阳性率为53．33％。表明建立的RT-PCR方法特异性强、敏感度高，可用于NDRV的l临床诊断和流行病学调查。关键词：新型鸭呼肠孤病毒；RT-PCR；检测中图分类号：$852．659．4文献标识码：B文章编号：1005—8567(2014)O1—0024—04E

3、stablishmentandApplicationofRT—PCRMethodforDetectionofNDRVKongFeng，YuanYuanhua，XiaoChengmou，HuangSh~ian3(1．SuichengAnimalHusbandryandVeterinaryMedicineStation，SuixiCounty，Zhanjiang524300，China；2．DaliTownAgriculturalServiceCenter，Foshan528231，China；3．CollegeofLifeScience，Fos

4、hanUniversity，Foshan528231，China)Abslract：Todevelopamethodfordetectionofnew—typeduckreovirus(NORV)，aRT—PCRmethodwasestablishedwith1paksofspecificprimersdesignedbasedontheconservedsequencesofS3geneofNDRV．RT—PCRresultsshowedthata298bpspecificalfragmentcouldbedetectedonlyfromt

5、heRNAofNDRV—QYstrain,andthesensitivityofRT—PCRreachedto83．4PgNDRVRNA．FifteentissuesamplesofsickducksfromdiferentareasofGuangdongprovinceweredetectedrespectivelybytheRT—PCRandthepositiveratewas53．33％(8／15)forNDRVwhichindicatedthattheRT—PCRmethodfordetectingNDRVwasrapid,speci

6、ficandsensitive，andcouldbeusedinclinicdiganoses．Keywords．New—typeduckreovims；RT—PCRdetection新型鸭呼肠孤病毒(New-typeduckre—前该病的诊断只能采用病毒分离和血清学方法。但ovirus，NDRV)病，是一种以肝脏不规则坏死、出血这些方法繁琐、费时，不适用于本病的快速诊断[6]。斑／点和心肌、腔上囊出血为主要特征的新疫病，王劭等吲研究证实NDRVs3基因存在一个变异区其发病率和病死率差异较大，但患病鸭日龄愈小，(390~975nt)。因此，本

7、实验根据已发表的NDRV发病率、病死率愈高。本病最早由陈少莺等报道f1]。NP03株S3基因序列(GenBank登录号：GQ888710)随后在我国各地也报道了此病，并从感染组织中设计了1对特异引物，建立了针对新型鸭呼肠孤分离到病毒q]。2005年冬季以来，该病在福建、广病毒S3基因的RT—PCR检测方法，为临床快速诊东、浙江、安徽等地番鸭、半番鸭、北京鸭、麻鸭群断及分子流行病学调查提供有效手段。中相继暴发。因该病病因不明，缺乏有效的防治措1材料与方法施而迅速蔓延，极大地威胁着养鸭业的发展_5]。目1．1病毒、病料及禽胚收稿日期：2013-1

8、2—26：通讯作者新型鸭呼肠孤病毒RT-PCR检测方法建立与初步应用一孔丰，等试验研究·25·新型鸭呼肠孤病毒(NDRV—QY)、鸭病毒性肝30s，72oC延伸30