DPPH自由基清除活性的光度微量滴定模型及应用.pdf

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1、第３５卷，第２期光谱学与光谱分析Ｖｏl．３５，Ｎｏ．２，ｐｐ４９２-４９６２０１５年２月ＳｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙａｎｄＳｐｅｃｔｒａlＡｎａlｙｓｉｓＦｅｂｒuａｒｙ，２０１５DPPH自由基清除活性的光度微量滴定模型及应用高云涛１，２，魏薇１，２，叶丽清１，２，李晓芬１，２，刘萍１，２，张宏教１，２，杨露１，２，虞姣姣１，２，茶家伟１，２１．云南民族大学化学与生物技术学院，云南昆明６５０５００２．云南民族大学民族药资源化学国家民委-教育部重点实验室，云南昆明６５０５００摘要传统的ＤＰＰＨ自由基清除活性

2、评价方法以半数清除浓度ＥＣ５０为评价指标，但ＥＣ５０随ＤＰＰＨ初始加入量增加而增加，随分析体积增加而减小，因此，不同条件ＥＣ５０值不具有可比性。提出以ＤＰＰＨ与抗氧化剂相互反应的化学计量数比（R）作为评价ＤＰＰＨ清除活性的指标，该指标只与ＤＰＰＨ与抗氧化剂相互反应的化学计量关系有关，与ＤＰＰＨ初始加入量和分析体积等因素无关，解决了ＥＣ５０可比性差的问题。提出了测定化学计量数比（R）的光度微量滴定法，建立了利用滴定过程吸光度差（ΔA）与抗氧化剂加入量之间的滴定方程计算R值、以R计算ＥＣ５０的光度微量滴定

3、模型，并利用芦丁对模型进行验证。结果：芦丁与ＤＰＰＨ反应R值在１．８１７～１．８４６之间，当ＤＰＰＨ加入量为１．１２×１０－７，２．２４×１０－７，４．４８×１０－７和６．７２×１０－７－３，２．３９２×１０－３，４．８１９×１０－３和７．２９２×１０－３－１。在ｍｏl时，分别计算得ＥＣ５０值分别为１．１９６×１０ｍｇ·ｍＬ此基础上，基于文献报道的芦丁清除ＤＰＰＨ条件，利用得到的芦丁R值计算出相应ＥＣ５０，结果与文献报道ＥＣ５０值相当。方法可比性好，样品消耗量明显降低，简单、成本低，结果可靠，为自由基

4、清除活性评价提出了一种新的思路。关键词ＤＰＰＨ自由基；光度微量滴定；滴定曲线；化学计量数比；芦丁中图分类号：Ｏ６５７．３文献标识码：ＡDOI：１０．３９６４／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００-０５９３（２０１５）０２-０４９２-０５已积累了各种抗氧化剂的ＥＣ５０数据，但因实验条件差异，可引言比性较差。因此，探索可比性好的新的抗氧化活性评价指标具有重要意义。此外，通常分离得到的活性物质样品量微［１］小，有待发展抗氧化活性微量化检测方法。酶标仪-微孔板方自由基清除实验是筛选抗氧化活剂的主要方法。羟自［２］［１０］由

5、基Ｆｅｔｏｎ体系、邻苯三酚自氧化超氧自由基体系和人工法是目前主要微量化检测方法，王丽等研究了芦丁清除［３］［１１］合成自由基如ＤＰＰＨ，ＡＢＴＳ，ＦＲＡＰ和ＯＲＡＣ等是最常ＤＰＰＨ的酶标仪-微孔板微量筛选模型。李晓芬等报道了用的自由基的发生体系，检测方法以分光光度法最常用，高ＤＰＰＨ清除活性的微量电化学滴定法。但相关研究较少，且效液相色谱质谱法（ＨＰＬＣ）、气质联用法、化学发光法（ＣＬ）需要专门的仪器。［３］和电子顺磁共振（ＥＰＲ，或ＥＳＲ）等方法也受到关注。１，１-芦丁（ｒuｔｉｎ）是一种黄酮类化合

6、物，具有明显的抗氧化活二苯基-２-三硝基苯肼（ＤＰＰＨ）自由基是种人工合成的氮中心［１２］。本文基于光度滴性，以及防治心脑血管疾病等药理活性自由基［４］，具有稳定、反应变色敏锐、线性关系好及操作简［１３］，提出一种新型ＤＰＰＨ清除的光度微量滴定法。定原理单快速等特点，广泛应用于抗氧化活性研究中。传统的ＤＰ-方法利用ＤＰＰＨ与抗氧化剂反应的化学计量数比［１４］评价抗ＰＨ清除能力评价基于清除率（Ｅ）的计算，以清除率达到氧化能力，以芦丁为研究对象，建立了化学计量数比及半数５０％时的抗氧化剂浓度即半数清除浓度

7、（ＥＣ５０）表达，而ＥＣ５０清除浓度ＥＣ５０计算的光度微量滴定模型。本法结合了光度法值与试验条件如ＤＰＰＨ的初始浓度有关，初始浓度大，则灵敏度高及滴定分析准确性的优点，样品消耗量明显降低，ＥＣ５０值随之增大。即使相同的抗氧化剂如芦丁，因ＤＰＰＨ初简单、成本低，为抗氧化活性的评估提出了一种新的思路。［５-９］。尽管目前始浓度差异，文献报道的ＥＣ５０值亦差异较大收稿日期：２０１３-０９-１３，修订日期：２０１３-１２-０４基金项目：国家自然科学基金项目（２１３６７０２５），云南省创新团队项目（２０１１ＨＣ

8、００８），云南省教育厅创新团队项目（２０１０ＵＹ０８），国家民委教育部民族药资源化学重点实验室开放基金项目（ＭＺＹ１２０１）资助作者简介：高云涛，１９６２年生，云南民族大学化学与生物技术学院教授ｅ-ｍａｉl：２３１４９７２０９６＠ｓｏｈu．ｃｏｍ第２期光谱学与光谱分析４９３（nＡ）的化学计量数比，R＝nＥ／nＡ，则，nＡ与ΔA关系为１实验部分ΔA＝εbnＥ＝εbRnＡ（６）Ｖ０Ｖ０１.１仪器、材料与试剂以恰好达到最大清除（Ｅｍａｘ）为滴定的终点，抗氧化剂