重组人胰岛素制备工艺

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1、维普资讯http://www.cqvip.com第39卷第4期四川大学学报(工程科学版)V01．39No．42007年7月JOURNALOFSICHUANUNIVERSITY(ENGINEE~NGSCIENCEEDITION)July2007文章编号：1009—3087(2007)04-0079-05重组人胰岛素制备工艺李晓红，朱惠玲，余蓉，李红霞(四川大学华西药学院，四川成都610041)摘要：为了提高重组人胰岛素的表达量，用Ecoli发酵表达(His)一Ars—Arg一人胰岛素原[(His)一Ars—Arg—humanproin

2、sulin，RRhPI]，并对影响RRhPI高效表达的各主要因素以及下游纯化工艺的各关键步骤进行优化。研究表明，RRhPIEcoli在最优培养基：5g／L胰蛋白胨，2g／L谷氨酸，7g／L酵母浸膏，0．5g／L酸铵，2．5g／L葡萄糖，2．7g／L甘油，100mg／L氨苄青霉素，50mg／L卡那霉素，pH7．2的条件下，用发酵罐进行发酵，在对数生长中期加入0．5mmo~LIPTG诱导4h，发酵过程中通过补料和转速调节，每升培养基能收获湿菌体51．2g，包涵体16．2g。在下游纯化工艺中，初步纯化前包涵体溶解液中一定浓度的B一巯基乙醇

3、以及复性液中一定浓度的氧化型谷胱甘肽将有助于RRhPI的复性。经过工艺条件的优化，人胰岛素最终收率可达74mg／L培养基。关键词：(His)一Ars—Arg一人胰岛素原；重组人胰岛素；大肠杆菌中图分类号：Q578；Q786文献标识码：APreparationofRecombinantHumanInsulinL／Xiao—hong，ZHUHui—ling，YUR0，UHong—xia(WestChinaSchoolofPharmacy，SichuanUniv．，Chengdu610041，China)Abstract：Toobtain

4、recombinanthumaninsulin(rhI)，(His)6一Arg—Arg—humanproinsulin(RRhPI)wasex—pressedbyEscherichiacoli(E．coli)．Intheoptimummediumof5g／Ltryptone，2g／Lglutamicacid，7g／Lyeastextract，0．5g／Lammoniumsulfate，2．5g／Lglucose，2．7g／Lglycerol，100mg／Lampicillin，50mg／Lkanamycin，andpH7．2，and

5、withtheadditionof0．5mmol／LWrGatintermediateexponentialphaseandinductionfor4h，51．2gwetE．coliand16．2ginclusionbodywereharvestedfrom1Lmediuminfermenter．TheresultsshowedthatcertainconcentrationofB—mercaptoethanolininclusionbodysolutionandoxidizedglutathioneinrefoldingsolut

6、ionwerehelpfultoRRhPIrefolding．Withthewell—optimizedtechnology，74mgrh1wasobtainedfrom1Lcultureme—diam．Keywords：(His)6一Arg—Arg—humanproinsulin；recombinanthumaninsulin；E．coli目前，国际上生产医用重组人胰岛素(recombi—B链，然后经化学再氧化法，使两条链在一定条件下nanthumaninsulin，rhI)的方法主要有3种：重新形成二硫键，得到hI。这一方法缺点

7、较多，目1)用基因工程大肠杆菌(Escherichiacoli，E．CO一前已较少使用；)分别发酵生产人胰岛素(humaninsulin，hi)的A、2)用基因工程E．coli发酵生产人胰岛素原(hu—manproinsulin，hPI)，后经加工形成hI。E．coli系统收稿日期：2006—01—20表达量高，但缺点是不利于表达hI这样的小蛋白，基金项目：科技部创新基金资助项目(06C26215100476)产物易降解，故常采用融和蛋白形式将hPI连接在作者简介：李晓红(1973一)，女，讲师，研究方向：微生物与生化药学．一个较大

8、的蛋白质后，表达产物需经过一系列复杂的后加工才能形成有活性的hi；维普资讯http://www.cqvip.com80四川大学学报(工程科学版)第39卷3)通过基因工程酵母菌发酵生产hPI，经后加1．4包涵体的收集和洗涤工形成hI。酵