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《aca的间接免疫荧光法显示多种动_植物细胞着丝点》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、年北京师范大学学报#自然科学版∃∀&)∗+&,−.//)12&们叮∗+4/67∗(./..:&+。!2&。∀第!卷第期%∋(03∗/.(5#26∋∗+8)9∃、;<;的间接免疫荧光法显示多种动植物细胞着丝点潘维林+∃王永潮””汪垫仁,,∃彭安范舰摘要用硬化性肌膜炎病人;9;血清的间接免疫荣光法显示了多种动、植物细胞的着丝,一,、、、、、、、、点其中包括=.>文昌鱼水媳惫姗蛆蝴草履虫洋葱大蒜吊兰蚕豆和葫芦醉等?表明在进化不同阶段的动、植物细胞均有同源的、高度保守性的着丝点蛋白?,间接,,关镇词抗着丝点抗体免疫荧光法植物细
2、胞着丝点分类号≅∀Α,ΒΑ!?????‘’〕Χ≅年Δ&(&/从一种变异的进行性系统性硬皮病#>88∃#<ΒΕ8Φ综合症∃的病人,,血清中发现了特异性的着丝点抗体以间接免疫荧光法可以显示细胞着丝点的荧光斑点从,?,〔“’、此为着丝点蛋白的深人研究开辟了新途径近≅年来研究进展十分迅速发现亮‘∃、,‘Γ’(,〕?)’∃鼠+Α,蛙即等细胞人及小鼠精子均可显示出着丝点抗原Ε∗(5Η∗Ι等俩进一步!,,用免疫荧光法结合蛋白免疫印迹法确定了人着丝点中有Χ≅和∀≅ϑ的蛋白抗原可与;<;,一,,,血清反应分别称之为<Ε2>;<Ε2>一<Ε2
3、>#开创了深人研究着丝点蛋白的?’≅’?新领域我们首次从硬化性肌膜龚病人血清中发现也有;<;的存在〔本工作以系统发,,用育不同阶段的动物特别是植物细胞为材料此种<;<血清的间接免疫荧光法探讨它们<”,’“〕,、之间是否存在同源性#过去已进行了初步报导∃为进一步研究着丝点蛋白的演化。结构与机能打下基础+材料与方法???????.+∗,.,,,,离体培并细胞的处里所用细胞有==ΚΛ<=Μ84?ΑΦΑ<=工=卜Γ≅?∗,,∋,等培养液用Ε1+.ΔΕΔ加人≅Ν小牛血清≅ΟΠΘ青霉素及≅Π1ΟΘ链霉素在,??,?,<≅孵箱中Α!6培养
4、取样前用≅≅ΡΠ1ΟΘ秋水仙酞胺阻断ΛΑΗ以≅ΡΝ胰酶消化,?,分离细胞≅≅!ΡΠ&+ΟΘϑ<Σ液低渗处理用细胞离心机#英国8Η∗)Τ&)∃将细胞离心于盖片上。?5,动物细胞的制取水昌鱼#−,Η匆?“肠了‘Η.叮云咖1+二宕Υ∃#采自青岛∃用二佃。?,≅≅ΡΝ甲醛杀死动物取其肌节ς水媳#=(∗、+1。沁哪∗∃取整个动物,直隶洲“二,。,环毛划#尸肠,礴苏仍∗才59从“‘5∃取消化道在清水中洗净上述材料分别用剪刀剪碎哪?国家自然科学荃金和国家教委博士点基金资助项目?,,,么∃,,作者单位∃北京师范大学生物系≅≅Χ!Ρ北京市新外大街
5、北京协和医院皮肤科≅≅!Ρ≅北京市东单Α条?一一,Υ一一收稿日期≅≅∀修回日期≅≅ΡΓΥ、第∀期潘维林等;的间接免疫荧光法显示多种动植物细胞着丝点;9∀已!≅?≅?,,>−8洗经Ρ纬胰酶与≅ΝΕΤΦ;在Α!6温箱中处理Α≅Π/)以滴管吹打分散细胞,。次以细胞离心机制片口Υ,?黄鳝#对。>坛阳∗+加5∃用冷冻切片机将肝切成Ρ林Π厚切片贴在盖片上大草9∗?5‘“、。,∃用细胞离心机将细胞离心在盖片上‘∗,>&9+.石Υ履虫#>∗(∗Λ耐∗6盘撕#·∃以!ΡΝ酒精消毒腹部,,,,,5>用剪刀剪开腹壁取出精巢在>−8中冲洗剪
6、除外膜剪,≅??≅Π/),≅?≅碎精巢在ΡΝ胰酶加≅≅肠ΕΤΦ;中Α!6消化在!ΡΠ&+ΟΘϑ<Σ中低渗处,用?理ΡΠ/)细胞离心机将细胞离心在载片上?。、∗Α植物细胞的处理高等植物中各取粒小麦#Φ而‘众、郎9∃玉米#儿。服娜、、,,,∗75∃大豆#‘勺“。,∗Ω∃蚕豆#:众依,“Ξ∗∃的种子加水令其吸胀然后放在垫?、;Σ石““,有湿滤纸的培皿中在室温下培养发芽洋葱#,“>∗∃大蒜。以‘,5∗红、劝在???口‘“室温中加水培养剪取上述植物的根尖各≅Α取吊兰#<再>再76“,户。Υ邵∃叶恤加?.?剪碎低等植物取葫芦醉#、,玩介‘
7、9∗直ΨΙ∃地上部分将上述各种植物凡妙群ΛΑΑ,5Η,,的取材分别用写果胶酶加Ν纤维素酶混合液消化Ρ℃中ΑΛ将细胞涂于盖片卜,,。微干浸火棉胶液空气干燥?口口??∀、,细胞固定将贴在盖片上的动植物细胞用新配制的>Θ>固定液#Ν多聚甲醛≅?≅∗ς,≅?≅!ΡΠ&一,&?&,Κ!?Ψ∃,∀6Ν2ΣΜ+ΟΘ盐酸赖氨酸≅Α!ΡΠ+ΟΘ磷酸缓冲液=在,,?(&)Ω一,?中固定≅Π/)再用>−8洗ΑΠ/)经≅≅ΡΝΦ/6≅≅Ο>−8消化ΑΠ/)>−8洗5Π/)(“·,!5间接免疫荧光染色将我们筛选出来的硬化性肌膜炎患者#2ΡΡ∃的;<;血
8、清以,“Θ,,>−8稀释≅Λ∀≅倍取Α≅滴在洁净的载片上将固定后的贴有细胞的盖片细胞面,,,Α,ΡΠ,向下扣在血清上放在湿盒中Α!℃孵育Α≅Π/)>−8洗次每次/)再用以>−8,?稀释≅倍的,ΣΦ<标记的羊抗人Σ1Ζ二
