伪狂犬病毒单克隆抗体的制备和鉴定.pdf

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1、·6·中国兽药杂志2014，48(3)：6～9／李建，等伪狂犬病毒单克隆抗体的制备和鉴定李建，曹娟，廖园园，刘洁，朱微，秦伟，秦红刚，漆世华，谢红玲(武汉中博生物股份有限公司，武汉430070)[收稿日期]2014-01—21【文献标识码]A[文章编号]1002-1280(2014)03-0006—04【中图分类号]$852．655[摘要]以伪狂犬病毒(PRV)作为免疫原，免疫BALB／c小鼠，融合之后经间接ELISA、IFA和IHC试验进行杂交瘤筛选，共获得2株能分泌针对PRV单克隆抗体(简称单抗)的杂交瘤细胞株，2株猪伪狂犬病毒单抗与猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪

2、圆环病毒2型、猪瘟病毒均无交叉反应，IFA结果显示单抗能与接种于猪睾丸细胞(ST)的PRV发生特异性反应，IHC结果显示单抗能用感染了PRV的猪神经组织发生反应，证实抗PRV单克隆抗体具有良好的特异性和敏感性，此结论为猪伪狂犬病毒抗原表位分析及相关抗原抗体诊断试剂盒的研制奠定了基础。[关键词]伪狂犬病毒；单克隆抗体；特异性；敏感性PreparationandCharacterizati0nofMonoclonalAntibodyagainstPseud0rabiesVirusLIJian，CAOJuan，LIAOYuan～yuan，LIUJie，ZHUWei，QINWei，Q

3、INHong—gang，QIShi—hua．XIEHong—ling(WuhaaChopperBiologicalCoLtd，Wuhan430070，China)Abstract：BytakingPRVasimmunogen，BALB／cmiceasmodelandusingindirectELISA，IHCandIFAforhybridomascreening，wefoundoutthat2hybridomacelllinestrainscouldsecretePRRSVmonoclonalantibody(hereafterreferredtoasMcAb)．Theset

4、wostrainsshowedsingleresistancetoporcineparvovirus，porcinepseudorabiesvirusandporcinewreathvirustype2also．IHCandIFAresultsalsosupportedthesingleresistancetoallaboveviruses，andthevaccinationinSTcellsinfectedwithPRVshowedspecificreaction，whichprovedthatthesemonoclonalantibodyhadgoodspecificit

5、yandsensitivity．PreparatiomofPRVmonoclonalantibodycouldprovidevaluabletoolsforfurtherdevelopmentofantigenepitopeanalysisandspecificdiagnosisreagent．Keywords：pseudorabiesvirus；monoclonalantibody；specificity；sensitivity伪狂犬病(Pseudorabies，PR)是由伪狂犬病毒复性好、且能持续的无限量供应等优点，对疾病的引起的猪、牛、羊等多种家畜、家禽及野生动物的一诊

6、断治疗以及疫苗的研究作出了巨大贡献。目前，种重要的急性传染病，又称“aujeszky氏病”l1]。在兽医临床工作中。PRV的诊断方法多采用病毒分随着养猪业的规模化和集约化发展，该病给我国养离、PCR技术和ELISA法。但是，这些方法不够完猪业带来了巨大的经济损失，因此，建立快速有效善和深入，高准确度、高灵敏度与快速、简便并存的的诊断检测方法对于控制和消灭PRV具有重要的检测方法目前还不成熟。为了更快速、更准确的诊意义。单克隆抗体技术是20世纪70年代生物学断疾病，以便对该病采取有效的防治措施，本试验领域的重要成果之一。单克隆抗体具有纯度高、重利用PRV全病毒免疫小鼠后建立分泌

7、抗PRV单克作者简介：李建，从事动物病毒体外诊断试剂的研究工作。通讯作者：谢红玲。E—mail：13419546263@163．COB2014，48(3)：6～9／李建，等中国兽药杂志隆抗体的杂交瘤细胞株，为建立特异性强、敏感性ELISA法测定细胞上清和腹水中单克隆抗体的效价高、简便、快速的抗原捕获ELISA诊断方法提供了1．7．2单克隆抗体的亚类用间接ELISA测定杂条件。交瘤细胞培养上清中单克隆抗体的亚类。1材料与方法1．7．3杂交瘤细胞的染色体分析按常规方法]1．1毒株、细胞、实验动物和其他试剂骨