色谱定量方法讲稿

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1、色谱定量方法马育松河北检验检疫局检验检疫技术中心内容定量分析基础定量方法影响定量分析结果准确性的因素色谱定量分析结果数据处理定量分析基础定量分析定义定量分析就是要确定样品中某一组分的准确含量。色谱定量分析是一种相对定量方法，是根据检测器的响应值与被测组分的量，在某些条件限定下成正比的关系来进行定量分析的。色谱定量分析的基本公式Wi（ci）=fiAi（hi）Wi——组分的质量；ci——组分的浓度；fi——组分的校正因子；Ai——组分的峰面积；hi——组分的峰高。想得到可靠的定量分析结果，需要准确测定fi、Ai或hi峰面积和峰高峰面积——色谱峰与峰底（或基线

2、）所围成的面积；峰高——色谱峰峰尖至峰底（或基线）的距离；峰底——从峰的起点与峰的终点之间的一条连接直线；基线——在正常操作条件下，仅有流动相通过检测器时所产生的响应信号曲线；一个完全分离的峰，峰底和基线是重合的。峰面积和峰高的测定使用积分仪和色谱工作站测量峰面积和峰高仪器根据设定的积分参数（半峰宽、斜率、最小峰面积或峰高等）和基线的设定来计算每个色谱峰的峰面积和峰高使用记录仪记录色谱峰需要手工测量的方法计算色谱峰的峰面积和峰高定量校正因子的测定绝对校正因子前述公式中，fi为i组分的校正因子，其物理意义是单位峰面积（峰高）所代表的i组分的量，是一个与i组

3、分的物理化学性质和检测器性质有关的常数；对同一个检测器，等量的不同物质其响应值是不同的，但对于同一种物质其响应值只与该物质的量（或浓度）有关。绝对校正因子计算公式fi=mi(ci)/Ai(hi)mi(ci)——i组分的质量（浓度）；Ai(hi)——i组分的峰面积（峰高）。由上式计算出的校正因子称为绝对校正因子，它只适用于这一个检测器。相对校正因子相对校正因子(f)是某物质(i)与基准物质(s)的绝对校正因子之比。计算公式f=fi/fs=mi(ci)×As(hs)/[ms(cs)×Ai(hi)]常用的基准物质对不同检测器是不同的热导检测器——苯氢火焰离子化

4、检测器——正庚烷定量方法色谱中常用的定量方法归一化法标准曲线法内标法标准加入法按测量参数分为峰面积法和峰高法峰面积法和峰高法的选择如何选用主要决定于在检测器的线性范围内，峰高和峰面积测量的准确性和重复性。在分离度较好，色谱峰形较好，峰面积可以准确测量时，特别是气相程序升温和液相梯度洗脱时，适宜用峰面积法定量；反之，如分离不好、峰形不佳时，用峰高法定量较好。保留时间短峰形较尖的色谱峰，峰高法比峰面积法更准确；保留时间长峰形较宽的色谱峰，峰面积法比峰高法更准确。归一化法定义——把所有出峰的组分含量之和按100%计的定量方法。当样品中的所有组分均能流出色谱柱，

5、并在检测器上都能产生信号的样品，可用归一化法定量。计算公式归一化法优点简便、准确，特别是进样量不容易准确控制时，进样量的变化对定量结果的影响很小。其它操作条件，如流速、柱温等变化对定量结果的影响也很小。缺点校正因子的测定较为麻烦主要用于GC的定量测定。标准曲线法也称为外标法，是色谱定量分析中比较常用的方法。具体做法：1、配制不同浓度的标准系列，在规定的色谱条件下进样，测量色谱峰的峰面积或峰高，用峰面积或峰高对样品浓度绘制标准工作曲线；2、在与绘制标准工作曲线完全相同的色谱条件下进行样品的测定，测量色谱峰的峰面积或峰高，然后根据峰面积或峰高在工作曲线上查出

6、样品组分的浓度；3、根据样品处理条件，计算原样品中组分的含量。标准曲线法单点校正法——当待测组分含量变化不大，且已知这一组分的大概含量时，也可不必绘制标准工作曲线，而是选取和待测组分会含量相近的已知浓度的标准溶液，与待测样品溶液在相同色谱条件下分别进样，测量待测组分和标准样品的峰面积或峰高，由下式计算样品溶液中待测组分的含量。单点校正法实际上是利用原点作为标准曲线上的另一点。因此，当方法存在系统误差（标准工作曲线不通过原点），单点校正法的误差较大。标准曲线法优点绘制好标准工作曲线后测定工作就很简单了，适合大量样品的分析。缺点1、每次样品分析的色谱条件很难

7、完全相同，容易出现误差；2、绘制标准工作曲线一般使用待测组分的标准样品，对样品前处理过程中待测组分的变化无法进行补偿。内标法内标法——选择适宜的物质作为欲测组分的参比物，定量加到样品中去，依据欲测组分和参比物在检测器上的响应值（峰面积或峰高）之比和参比物加入的量进行定量分析的方法。内标法与标准曲线法相比，有利于消除色谱条件不完全重现、进样量不准确等所带来的误差。内标法内标法的关键是选择合适的内标物。内标物的选择条件：1、内标物应是原样品中不存在的纯物质，该物质的性质应尽可能与待测组分相近，不与被测样品起化学反应，同时要能完全溶于被测样品中；2、内标物的峰

8、应尽可能接近待测组分的峰，或位于几个待测组分的峰中间，但必须与样品中所有峰不重叠