徐淮山羊Oct4启动子功能的初步分析-论文.pdf

《徐淮山羊Oct4启动子功能的初步分析-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、蘧Hereditas(Beijing)2014年8,EJ，36(8)：793—799WWW．chinagene．on研究报告徐淮山羊Oct4启动子功能的初步分析韦光辉，李东，左其生，张亚妮，朱睿，张蕾，刘志永，邱峰龙，李碧春扬州大学动物科学与技术学院，江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室，扬州225009摘要：为确定徐淮山羊Oct4(Octamer．bindingtranscriptionfactor4)基因启动子活性区域，并初步探讨TSA(TrichostatinA)和VPA(Valproicacid)对Oct4基因启动子活性的调控作用，文章采用Primer5．0设计包含Oct4

2、基因启动子不同长度片段的特异性PCR引物，扩增并定向克隆至PGL3．Bacic荧光素酶报告载体，分别转染gEF、P19和COS7细胞，通过TSA和VPA诱导，进行双荧光报告基因活性检测。同时用Oct4启动子一1516～+30bp片段替换pEGFP．N1中的CMV启动子，通过GFP荧光表达检测Oct4启动子的活性。结果表明：在gEF、P19和COS7细胞中Oct4启动子各片段均表现出不同程度的活性，且最强活性区域为上游一1516～+30bp，基本活性区域为一238-+30bp；在一1516-一946bp、一615～96bp区域存在正调控元件，在一1936-一1516bp、一946-一6

3、15bp区域存在负调控元件；终浓度为1gmol／L的TSA和4mmol／L的VPA为诱导的最佳浓度，均能显著增强Oct4基因启动子的活性；一1516-+30bp片段能够启动GFP的表达。研究结果为揭示Oct4基因的转录调控机制奠定了基础关键词：Oct4；启动子活性；TSA；VPA；诱导FunctionalanalysisofOct4promoterinXuhuaigoatGuanghuiWei，DongLi，QishengZuo，YaniZhang，RuiZhu，LeiZhang，ZhiyongLiu，FenglongQiu，BichunLiKeyLaboratoryofAnimal

4、BreedingReproductionandMolecularDesignforJiangsuProvince，CollegeofAnimalScienceandTechnology，YangzhouUniversity，Yangzhou225009，ChinaAbstract：TheaimofthisstudywastodeterminetheactivityregionofOct4(octamer-bindingtranscriptionfactor4)promoterinXuhuaigoat，andtoinvestigatetheefectofTSA(trichostatin

5、A)andVPA(valproicacid)onOct4promoterac-tivitySpecificPCRprimersofOct4promoterincludingdiferentlengthsoffragmentsweredesignedbyPrimer5．0，thenwereamplifiedandclonedintoPGL3-Bacicluciferasereportervector．AllthereconstructionvectorsweretransfectedintogEF,P19andCOS7cells，respectively．AfterTSAandVPAt

6、reatment，theactivityofdual—luciferasereportergeneinthesethreetransfectedcellswasdetected．Inaddition，theCMVpromoterofpEGFP-N1wasreplacedbythe一1516—+30bp收稿日期：2014—01-22；修回日期：2014—02—28基金项目：国家转基因重大专项(编号：2013ZX08008—003)资助作者简介：韦光辉，在读博士，研究方向：分子克隆和基因表达调控机制。E-mail：weiguanghui2006@gmail．com通讯作者：李碧春，教授，

7、博士生导师，研究方向：动物胚胎工程与生物技术。E—mail：yubcli@yzu．edu．cnDOI：10．3724／SPJ．1005．20l4．0793网络出版时间：2014—5—3017：13：49URL：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／11．1913．R．20140530．1713．002．html794连Hereditas(Beijing)2014第36卷fragmentofOct4promoter,GFPfluor