EphA7基因沉默对人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠移植瘤生长的影响-论文.pdf

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1、中华肝胆外科杂志2014年8月第2O卷第8期ChinJHepatobiliarySurg，August2014，Vo1．20，No．8·599··实验研究·EphA7基因沉默对人肝癌细胞SMMC一7721裸鼠移植瘤生长的影响张弓李捷翟文龙郭文治赵永福张水军【摘要】目的探讨RNA干扰抑制EphA7基因对人肝癌细胞SMMC一7721裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法EphA7小干扰RNA(siRNA)重组质粒采用脂质体介导法转染肝癌细胞SMMC一7721，同时设空载体转染组、未转染组和对照组。对照组不注射细胞，仅注入磷酸盐缓冲液(PBS)做对照。裸鼠移植瘤模型采用左上肢皮下注射的方法建立。应用实时P

2、CR、免疫组化和蛋白印迹方法检测移植瘤组织中EphA7基因和蛋白的表达情况，同时比较成瘤时间、肿瘤体积和重量等。结果注射细胞后9～12天，除对照组外其余各组均可在注射部位发现肝癌移植瘤形成。移植瘤形成后第35天，与未转染组和空载体转染组比较，转染组移植瘤生长速率、肿瘤体积和重量均明显降低(P<0．05)。转染干扰载体pRNA—siEphA7对裸鼠肝癌移植瘤的的抑瘤率为55％。免疫组化结果显示，与未转染组和空载体转染组比较，转染组移植瘤组织中EphA7蛋白阳性染色的细胞较少，染色较浅，呈浅黄色。实时PCR和蛋白印迹结果显示，与未转染组和空载体转染组比较，转染组移植瘤组织中EphA7基因和蛋白的

3、表达明显低于未转染组和空载体转染组，差异有统计学意义(P<0．05)。结论利用siRNA抑制EphA7的表达可减缓肝癌细胞SMMC-7721在活体动物体内的生长，有望成为肝癌基因治疗的靶点。【关键词】肝细胞癌；裸鼠移植瘤；RNA干扰；基因EphA7；基因疗法RNAinterferencetargetingEphA7inhibitsgrowthofSMMC-7721cellxenograftinnudemiceZhangGD，LiJie，ZhaiWenlong，GuoWenzhi，Zhaon，ZhangShuijun．DepartmengofHepatobiliary-pan—creaticS

4、urgery，theFimtAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity，Zhengzhou450052，ChinaCorrespondingauthor：ZhangShuijun，Email：zhangshuijun@M．edu．cn【Abstract】0bjeetiveToinvestigatetheeffectsofRNAinterferencetargetingEphA7geneonthegrowthofSMMC-7721cellxenograftinnudemice．MethodsRecombinantplasmidofEphA7gene—targ

5、e—tingsiRNAwastransfectedintohepaticcancerSMMC-7721cellsbyLipofectamine2000．comparingwiththeemptyvectortransfectedgroup，untransfeetedgroupandcontrolgroup．ThenudemicetumormodelwasestablishedbysubcutaneousiniectionofhepaticcancerceUsintheleftupperlimbofthemice．ControlgroupwasiniectedwithPBSasblank．Re

6、al—timePCR。immunohistocbemistryandWesternblotwereemployedtodetectthemRNAandproteinexpressionsofEphA7intumortissues．Thetumorformationtime，tumormassandweightoftumorwerealsoconsideredintheanalysis．ResultsAbout9—12daysaftertheinjectionoftumorcells，thexenografttumorformationcanbeobservedaroundtheinjecti

7、onsiteexceptthecontrolgroup．35daysaftertumorformation，therewereobviousdecreasesinthetumorgrowthrate，tumormass，aswellastumorweightintransfeetedgroup，comparingwithemptyvectortransfectedgroupanduntransfectedgr