Wnt3诱导小鼠肝前体细胞上皮-间质转化-论文.pdf

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1、第二军医大学学报2013年11月第34卷第l1期http：／／www．ajsmmu．cn·1166·AcademicJournalofSecondMilitaryMedicalUniversity，Nov．2013，Vo1．34，No．11·论著·DOI：10．3724／SP．J．1008．2O13．01166Wnt3诱导小鼠肝前体细胞上皮一间质转化胡代曦，张锡峰，张超，钟沁。，冯涛，黄佳秭”1．重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心，重庆4000162．重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室，重庆4000163．重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室，重庆400016[摘要]目的探讨w

2、nt3对小鼠肝前体细胞(14—19)发生上皮一间质转化的影响。方法分别将空载体Ad—GFP和表达wnt3的腺病毒Ad—GFP—wnt3转入小鼠肝前体细胞中，显微镜下观察细胞形态变化。细胞划痕实验和细胞迁移实验观察14—19细胞迁移能力。实时荧光定量PCR和蛋白质印迹分析分别检测14—19细胞中上皮标记物和间质标记物的表达改变。结果显微镜下可见高表达wnt3的14—19细胞由不规则多边形变为长梭形。细胞划痕实验和细胞迁移实验结果显示，高表达wnt3的14—19细胞迁移能力明显提高，与空载体转染细胞相比差异具有统计学意义(P

3、herin、vimentin和twistl的mRNA和蛋白水平表达上调，相反上皮标记物E—cadherin的mRNA水平和蛋白水平表达下调，与空载体转染细胞相比差异具有统计学意义(P<0．01)。结论Wnt3能够促使小鼠肝前体细胞发生上皮一间质转化，提示其可能参与了肝纤维化的发展进程。[关键词]wnt3；肝前体细胞；上皮一间质转化；肝硬化[中图分类号]R329．28；R575．2[文献标志码]A[文章编号]0258—879X(2013)11-1166—05Wnt3-inducedepithelial--mesenchymaltransitioninmousehepaticprogenitorc

4、ellsHUDai—xi，ZHANGXi—feng．-，ZHANGChao，ZHONGQin，FENGTao，HUANGJia-yi1．MolecularMedicineandCancerResearchCenter，ChongqingMedicalUniversity，Chongqing400016，China2．DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology，CollegeofBasicMedicine，ChongqingMedicalUniversity，Chongqing400016，China3．DepartmentofPathophysiol

5、ogy，CollegeofBasicMedicine，ChongqingMedicalUniversity，Chongqing400016，China[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheimpactofwnt3uponepithelial-mesenchymaltransitioninmousehepaticprogenitorcells(t4—19cells)．MethodsAd—GFP-wnt3virusandblankAd—GFPweretransfectedinto14—19cells；cellmorphologywasobservedundermic

6、roscope．Themigrationabilityof14—19cellswasexaminedbywound—healingassayandtranswellassay．Theexpressionofepithelialandmesenchymalmarkersin14—19cellswasdetectedbyreal-timePCRandWesternblottinganalysis．ResultsMicroscopicobservationfoundthat14—19cellschangedfromanepithelialcharacteristicshapeintoaspindle

7、-likeshape．Wound—healingassayandTranswellassayshowedthatthemigrationabilityof14—19cellshighlyexpressingwnt3wassignificantlyenhancedcomparedwiththeblankcontrolgroup(P<0．01)．Real—timePCRandWesternblotti