DNA聚合酶的定义.doc

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1、DNA聚合酶的定义发布时间：2010-6-3浏览次数：775次DNA聚合酶的定义　　DNA聚合酶（DNApolymerase）是细胞复制DNA的重要作用酶。DNA聚合酶,以DNA为复制模板，从将DNA由5'端点开始复制到3'端的酶。DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成（在具备模板、引物、dNTP等的情况下）及其相辅的活性。 　　真核细胞有5种DNA聚合酶，分别为DNA聚合酶α（定位于胞核，参与复制引发具5'－3'外切酶活性），β（定位于核内，参与修复，具5'－3'外切酶活性），γ（定位于线粒体，参与线粒体复制具5'－3'和3'－5

2、'外切活性），δ（定位核，参与复制，具有3'－5'和5'－3'外切活性），ε（定位于核，参与损伤修复，具有3'－5'和5'－3'外切活性）。 　　原核细胞有3种DNA聚合酶，都与DNA链的延长有关。DNA聚合酶I是单链多肽，可催化单链或双链DNA的延长；DNA聚合酶II则与低分子脱氧核苷酸链的延长有关；DNA聚合酶III在细胞中存在的数目不多，是促进DNA链延长的主要酶。  DNA聚合酶的发现　　在50年代的中期，A.Kornberg和他的同事们就想到DNA的复制必然是一种酶的催化作用，于是决心分离出这种酶并研究其结构和作用机制。为了

3、达到这个目的，他们分离的蛋白，然后加到体外合成系统中即同位素标记的dNTP、Mg2＋及模板DNA，经过大量的工作，于1956年终于发现了DNA聚合酶Ⅰ（DNApolymeraseⅠ，DNApolⅠ）原来称为Kornberg酶。以后又相续发现了DNApolⅡ和DNApolⅢ。开始人们以为DNApolI是细菌中DNA复制主要的酶类，后来发现DNApolⅠ的突变株照样可以复制，才清楚它并不是主角。现在已经知道在DNA复制中起主导作用的是DNApolⅢ，至于polⅡ的功能现在还不十分清楚。DNA聚合酶的共同特点是： 　　（1）需要提供合成模板

4、；（2）不能起始新的DNA链，必须要有引物提供3'－OH；（3）合成的方向都是5'→3'（4）除聚合DNA外还有其它功能。　　所有原核和真核的DNA聚合酶都具有相同的合成活性，都可以在3'－OH上加核苷酸使链延伸，其速率为1000Nt/min。加什么核苷酸是根据和模板链上的碱基互补的原则而定的。 　　E.coli的DNApolⅠ涉及DNA损伤修复，在半保留复制中起辅助的作用。DNApolⅡ在修复损伤中也是有重要的作用。DNApolⅢ是一种多亚基的蛋白。在DNA新链的从头合成（denovo）中起复制酶的作用。 DNA聚合酶的共性　　此酶

5、最早在大肠杆菌中发现，以后陆续在其他原核生物及微生物中找到。这类酶的共同性质是:[1]以脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)为前体催化合成DNA;[2]需要模板和引物的存在;[3]不能起始合成新的DNA链;[4]催化dNTP加到生长中的DNA链的3'-OH末端;[5]催化DNA合成的方向是5'→3'。下面首先介绍大肠杆菌的DNA聚合酶，然后简略说明一下其他原核生物的DNA聚合酶和真核生物DNA聚合酶。 功能　　[1]聚合作用:在引物RNA'-OH末端，以dNTP为底物，按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐个将核苷酸加上去，就是DNApolⅠ

6、的聚合作用。酶的专一性主要表现为新进入的脱氧核苷酸必须与模板DNA配对时才有催化作用。dNTP进入结合位点后，可能使酶的构象发生变化，促进3'-OH与5'-PO4结合生成磷酸二酯键。若是错误的核苷酸进入结合位点，则不能与模板配对，无法改变酶的构象而被3'-5'外切酶活性位点所识别并切除之。 　　[2]3'→5'外切酶活性──校对作用:这种酶活性的主要功能是从3'→5'方向识别和切除不配对的DNA生长链末端的核苷酸。当反应体系中没有反应底物dNTP时，由于没有聚合作用而出现暂时的游离现象，从而被3'→5'外切酶活性所降解。如果提高反应体

7、系的温度可以促进这种作用，这表明温度升高使DNA生长链3'末端与模板发生分离的机会更多，因而降解作用加强。当向反应体系加入dNTP，而且只加放与模板互补的上述核苷酸才会使这种外切酶活性受到抑制，并继续进行DNA的合成。由此推论，3'→5'外切酶活性的主要功能是校对作用，当加入的核苷酸与模板不互补而游离时则被3'→5'外切酶切除，以便重新在这个位置上聚合对应的核苷酸。在某些T4噬菌体突变株中DNA复制的真实性降低，而易发生突变，从此突变株分离得到的T4DNA聚合酶的3'→5'外切酶活性很低。相反，另外一些具有抗突变能力的T4突变株中的T

8、4DNA聚合酶的3'→5'外切酶活性比野生型高得多，因此，其DNA复制真实性好，变异率低。可见，3'→5'外切酶活性对DNA复制真实性的维持是十分重要的。　　[3]5'→3'外切酶活性──切除修复作用:5'→3'外切酶活