土壤酸性磷酸酶活性测定.doc

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1、土壤酸性磷酸酶活性测定土壤有机磷转化受多种因子制约，尤其是磷酸酶的参与，可加速有机磷的脱磷速度。在pH4-9的土壤中均有磷酸酶。积累的磷酸酶对土壤磷素的有效性具有重要作用。研究证明，磷酸酶与土壤碳、氮含量呈正相关，与有效磷含量及pH也有关。磷酸酶活性是评价土壤磷素生物转化方向的强度的指标。磷酸苯二钠比色法1.试剂配制（1）0.5%磷酸苯二钠（用缓冲液配制）。（2）pH5醋酸盐缓冲液。a.醋酸盐缓冲液（pH=5.0）A：0.2mol/L醋酸溶液（11.5mL，稀释至1000mL）B：0.2mol/L醋酸钠溶液（16.4gC2H3O2Na或27.2gC2H3O2Na·3H2O定容至100

2、0mL）14.8mlA+35.2mlB混合即得（3）氯代二溴对苯醌亚胺试剂：取0.125g2,6-二溴苯醌氯酰亚胺，用10ml96%乙醇溶解，贮于棕色瓶中，存放在冰箱里。保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用。（4）酚的标准溶液：酚原液——取1g重蒸酚溶于蒸馏水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中。酚工作液——取10ml酚原液稀释至1L（每毫升含0.01mg酚）。（5）甲苯。（6）0.3%硫酸铝溶液。标准曲线绘制：取1、3、5、7、9、11、13ml酚工作液，置于50ml容量瓶中，每瓶加入5ml缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，30min后比色测定。以吸光度为横坐标，浓度为纵

3、坐标（mg）绘成标准曲线。2.操作步骤称5g风干土置于200ml三角瓶中，加2.5ml甲苯，轻摇15min后，加入20ml0.5%磷酸苯二钠（用醋酸盐缓冲液配制），仔细摇匀后放入恒温箱，在37℃下培养24h后于培养液中加100ml0.3%硫酸铝溶液并过滤。吸取3ml滤液于50ml容量瓶中，然后按绘制标准曲线所述方法显色。用硼酸缓冲液时，呈现蓝色，在分光光度计上于660nm处比色。3.结果计算磷酸酶活性，以24h后1g土壤中释出的酚的毫克数表示。酚（mg）=a*8式中a—从标准曲线上查得的酚毫克数8—换算成1g土的系数