miRNA-106a在肝癌中的表达及其作用-论文.pdf

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1、陕西医学杂志2Ol4年2月第43卷第2期139一陈～=～茎一酵一～一-一～要～一～一～一陈一～一_～腿一～一～一茎叭一～～一一～Ⅲ～一～一～～一．一№一～一～一～№一～枷一一．一盹～耨&一一～耋一妻miRNA一106a在肝癌中的表达及其作用西安交通大学医学院(西安710061)陈双江△王铮◇姚英民◇郭雄▲摘要目的：检测miRNA一106a(miR一106a)在肝癌中的表达情况，体外观察其对肝癌细胞株HepG一2细胞增殖、侵袭转移能力的影响。方法：取肝癌手术标本及其对应的癌旁组织，通过实时定量PCR检测miR一106a在肝癌中的表达情况，转染miR一106am

2、imics或inhibitors及其NC对照后，用MTT法检测肝癌细胞株HepG一2的增殖能力变化，使用transwell小室检测侵袭能力变化，同时使用实时定量PCR和Westernbolt观察干预后细胞内TGFBR2及EMT指标E—cadherin、N—cadherin和Vimentin的mRNA及蛋白水平变化。结果：miR一106a在肝癌中上调，转染miR一106amimics后肝癌细胞增殖率升高，侵袭能力加强，实时定量PCR和Westernbolt结果显示TGFBR2表达受到抑制，EMT指标E—cadherin表达下调N—cadherin和Viment

3、in的表达上调，而转染miR一106ainhibitors后结果相反。结论：miR一106a在肝癌中上调，促进肝癌细胞增殖、侵袭，其机制可能与抑制TGFBR2和E—cadherin，上调N—cadherin和Vimentin的表达有关。主题词肝肿瘤微RNAs细胞增殖基因表达调控，肿瘤【中图分类号1R735．7【文献标识码】Adoi：10．3969／j．issn．1000—7377．2014．02．004肝癌是发病率较高的肿瘤之一，其恶性程度高、进对应的癌旁组织中的表达情况，并通过人工合成miR一展快、病死率高，确诊时大部分已属中晚期，从而失去106amimi

4、cs或inhibitors转染肝癌细胞株HepG～2，治疗的最佳时机，复发和转移是影响肝癌预后的主要观察其对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响，并探讨其因素。微核糖核酸(miRNA)是一类进化上高度保守、内在分子机制。内源性的非编码单链小RNA，可以通过抑制或降解靶材料与方法基因mRNA从而达到抑制靶基因的作用¨】]。有研究1材料西安交通大学医学院第一附属医院显示大概有60编码蛋白的基因受到miRNA的调外科手术切除的肝癌组织及其对应癌旁正常组织20控l_2]。miRNA一106a(miR一106a)作为一种上调的致癌例(男14例，女6例，平均年龄56．7岁)，术

5、后均经病基因在许多肿瘤中被证实]。我们通过实时定量理检查确认。标本收集后置于一8O℃冰箱保存，所有PCR技术检测miR一106a在2O例肝癌手术标本与其患者术前均未经放疗、化疗。人肝癌细胞HepG一2由西安交通大学医学院生物医学研究实验中心提供并保△陕西省安康市紫阳县人民医院普外科存。DMEM培养基及胎牛血清购自美国Gibco公司。◇西安交通大学医学院第一附属医院TRIzol试剂购自美国ambion公司，逆转录试剂盒购▲通讯作者自日本TaKaRa公司，所有引物委托北京鼎国昌盛公140陕西医学杂志2014年2月第43卷第2期司设计并合成，实时定量PCR试剂SY

6、BRGreenReal—tin的表达情况(以GAPDH做内参)。反应条件：变性timePCRMasterMix购自日本TaKaRa公司，脂质95℃30s，退火60℃30s，延伸72。C30s，共4O个循环，体2000转染试剂购自美国Invitrogen公司，miR一10672C延伸5min终止反应。所有反应均设一立3个一砌复孔，～mimics／inhibitors及NC对照购自上海吉玛公司，用2△△n计算癌组织比癌旁组织的相对表达量。MTT购自美国Sigma公司，DMSO购自美国Sigma6细胞培养及分组细胞株用含10小牛血清公司，transwell小室购自

7、美国Millipore公司；Matri—和双抗的DMEM培养基在37℃，5CO。的培养箱中gel基质胶购自美国BD公司，GAPDH、TGFBR2、E—培养。实验将肝癌细胞分为3组，mimics组(即转染cadherin、N—cadherin和Vimentin抗体均购自美国miR一106amimics组)、NC组(转染无意义寡核苷酸Santacruze公司。其他试剂均为国产分析纯。组)、inhibitors组(即转染miR一106ainhibitors组)。2总RNA提取称取保存在一80℃冰箱中的细胞接种于6孔板中，待融合度为5O时按Lipo2000组织10m

8、g，在冰上用一次性研磨皿磨碎，并加入1ml说明书分别