DC—CIK治疗慢性乙型肝炎患者疗效观察-论文.pdf

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1、肝脏2013年1()月第18卷第1()期·677··临床与基础研究·DC—CIK治疗慢性乙型肝炎患者疗效观察韩际奥马应杰王志凌秦宝山郭云霞韩莉王郁杰【摘要】目的研究乙型肝炎表面抗原(HBsAg)活化后的树突状细胞(Dc)和细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对慢性乙型肝炎的治疗效果。方法抽取慢性乙型肝炎患者自体外周血，培养自体DC-CIK，经HBsAg活化后回输患者体内。检测治疗前和治疗24周后患者外周血HBVDNA、ALT和HBsAg水平。结果DC—CIK细胞治疗可抑制乙型肝炎患者外周血HBVDNA复制[(6．84±1．06)log。拷贝／mL对(5．29±1

2、．77)log拷贝／mL，P=0．ooo]，病毒学应答率为63．6。同时可减少HBsAg表达、降低ALT水平，但差异无统计学意义[(176．8±112．7)ng／mL对(153．0±120．6)ng／mL，P：0．O85]；(199．1±108．2)IU／mL对(166．2±131．8)IU／mL，P=0．121]。结论DC—CIK治疗是一种有效的抗乙型肝炎病毒方法。【关键词】慢性乙型肝炎；树突状细胞；细胞因子诱导的杀伤细胞；乙型肝炎表面抗原我国现有的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者约疫性肝炎、脂肪肝、酒精性肝炎及药物性肝炎等其他9300万人，其中慢性乙型肝

3、炎患者约2000万例Ⅲ。肝脏疾病患者。DC—CIK治疗后随访24周。人组前6干扰素、核苷类似物等药物作为主要的抗病毒措施，个月至DC—CIK治疗随访期间，患者未接受任何抗病疗效欠佳，最主要的原因就是免疫耐受限制了药物作毒及免疫抑制剂治疗，并签署知情同意书。用，它们只能抑制病毒的复制，并不能清除病毒。近AIM—V无血清培养基为美国GIBCO产品，人淋年来树突状细胞(DC)和细胞因子诱导的杀伤细胞巴细胞分离液(Ficol1)为北京索莱宝科技有限公司产(CIK)的研究进展为乙型肝炎的治疗开辟了广阔的前品，CD3单克隆抗体购自武汉生物制品研究所，IFN一景，有望在清

4、除HBV的治疗中发挥更重要的作用。7购自上海凯茂生物医药有限公司，rhIL一2购自辽宁本研究在慢性乙型肝炎患者外周血中分离培养出卫星生物制品研究所(有限公司)，rhGM—CSF，rhlL一DC，经HBsAg活化，与CIK共同培养、扩增后回输1，rhIL一4为美国PerproTech公司产品，HBsAg(疫给患者，检测治疗前后患者转氨酶、病毒抗原及病毒苗)为英国葛兰素史克公司产品。ALT检测采用日立载量的变化，观察DC—CIK对慢性乙型肝炎的治疗效7600—020型全自动生化分析仪。HBVDNA检测采果。用AgilentTechnologiesStratage

5、neMx3000P型实时荧光定量PCR仪检测。HBsAg定量检测采用安图绿资料和方法科生物工程有限公司LUMO发光仪及相关试剂盒。一、病例资料及材料二、方法依照《慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)》诊断(一)DC、CIK的体外培养、扩增标准]，收集郑州人民医院消化内科2011年4月至1．外周血单个核细胞(PBMCs)的提取：无菌条2011年10月住院的慢性乙型肝炎患者33例，均为件抽取各组研究对象外周血100mL，肝素抗凝，HBsAg、HBeAg、抗-HBc三项阳性。其中男18例，女Hanks液对倍稀释．吸取淋巴细胞分离液，缓慢加稀15例，平均年龄31(2

6、0～45)岁。患者均存在不同程释血液至人淋巴细胞分离液上(稀释血液：分离液=度ALT(80～422U／L)、AST(56～378U／L)升高且1：1)，室温2000×g离心20min．离心后用吸管轻血清HBVDNA含量升高(2．54x10～7．86×10拷轻吸出位于血浆层与淋巴细胞分离液层之间的单个贝／mL)。排除标准：合并肝硬化、重型肝炎及自身免核细胞层，将所得悬液用5倍体积的Hanks液洗涤2基金项目：河南省院科技合作基金资助项目(092106000032)作者单位：450003郑州人民医院消化内科，郑州市消化疾病研究所通信作者：马应杰，Email：hs

7、j9436@sina．cornChineseHepatology，Oct．2013，Vo1．18，No．10·678·次，依次以1800×g，1200×g离心5rain．末次离心二、DC—CIK对HBsAg的影响后，弃上清，用RPMI1640培养液(含2自体血清)与治疗前比较，接受DC—CIK治疗24周的慢性乙重悬混匀，调整细胞浓度为(4～5)×10。／mL，置于型肝炎患者HBsAg表达水平下降[(176．8±112．7)37℃、50mL／LCO培养箱培养2h。ng／mLvs(153．0±120．6)ng／mL2，但差异无统计学2．CIK的体外诱导、扩增：P

8、BMCs培养2h后收意义(P=0．085)。集的非贴