原钙黏蛋白-20在肺癌组织中表达及其机制-论文.pdf

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1、中华实验外科杂志2014年9月第31卷第9期ChinJExpSurg，September2014，Vo1．31，No．9·临床研究·原钙黏蛋白．20在肺癌组织中表达及其机制卓毅冯茂辉【摘要】目的探讨原钙黏蛋白-20(PCDH20)的表达与其启动子区甲基化水平的关系以及PCDH20基因在肺癌发生、发展中的作用及相关的作用机制。方法采用半定量逆转录一聚合酶链反应(SqRT—PCR)检测PCDH20在15例正常成人肺组织和20例肺癌组织的表达；用甲基化特异性PCR(MSP)检测20例肺癌组织中PCDH20启动子区的甲基化水平。结果PCDH20在几乎所有正常组织中表达，在95％的肺癌组织中不表达

2、(19／20)。80％的肺癌组织中存在PCDH20启动子的甲基化，而在正常肺组织中未检测到。结论DNA甲基化是PCDH20在肺癌中表达下调或缺失的原因之一，PCDH20在大肠癌的发生发展中起抑制作用。【关键词】肺癌；原钙黏蛋白-20Expressionandpotentialmechanismofprotocadherins10inlungcancertissuesZhuoYi，FengMaohui．DepartmentofThoracicSurgery．f^eFirstAffiliatedHospitalofFujianMedicalUniversity．Fuzhou35ooo5．Ch

3、ina【Abstract】objectiveToexplorethefunctionandpotentialmechanismofprotocadherin20(PCDH20)geneinlungcancerdevelopment．MethodsExpressionofPCDH20wasdetectedin15casesofnormaladulttissuesand20casesof1ungcancerbysemi．quantitativereversetranscription—polymerasechainreaction(SqRT—PCR)．andthelevelofPCDH20p

4、romotermethylationinlungcancerandnormaltis—sueswasevaluatedbymethylation—specificPCRfMSP1．ResultsPCDH20wasexpressedinallnormala—duhtissuesbutloworsilencedin95％(19／20lungcancertissue．MethylationoftheCpG—richpromoterregionofPCDH20wasdetectedin80％(12／15)lungtumors，whichwassignificantlydifferentfromt

5、hestatusinnormallungtissues(P<0．O1)．ConclusionTheseresultssuggestthatepigeneticsilencingofPCDH20iScommoninlungcancer．andPCDH20actsasatumorsuppressorinthecarcinogenesis．【Keywords】Lungcancer；Protocadherins20原钙黏蛋白．20(PCDH20)是protocadherin家族的链反应(RT．PCR)及Westernblot检测。Trizol试剂盒成员，它的编码基因定位于13q21染色体¨。J。

6、既往有购自上海生工生物工程技术服务有限公司，PCR扩增报道PCDH．PC在前列腺癌组织中表达下调或缺失与仪GeneAmpPCRSystem9700。其启动子区的甲基化水平相关，而且能够抑制前列腺2．Westernblot检测黑皮质素4受体(MC4R)蛋白癌细胞的生长。然而，PCDH20在肺癌发生、发展表达：取组织加裂解液，匀浆，1600r／min离心20min，中的作用及相关的细胞内信号转导目前尚不明确。本取上清液，测蛋白浓度。(1)提取总RNA的组织，加研究旨在探讨PCDH20在肺癌患者组织中表达及其机入氯仿离心后，取中下层混合物；(2)加入0．3ml无水制。乙醇，混匀，室温放置3mi

7、n，4cc离心，2000g，5min；(3)取上清(分2个EP，每个4001)，加入异丙醇材料与方法1．5ml沉淀蛋白质，室温放10min，4℃离心，12000g，1．一般资料：选取福建医科大学附属第一医院10min，弃上清；(4)用含0．3mg盐酸胍的95％乙醇洗2012年7月至2014年4月手术切除的20例肺癌组织涤蛋白沉淀，每个EP管1ml(1mlTfizol12ml洗涤)及其相应癌旁正常组织标本15例，其中男11例，女9室温