阿伐他汀通过磷脂酰肌醇3-激酶／丝氨酸苏氨酸蛋白激酶／哺乳动物雷帕霉素靶蛋白途径调节HL-60白血病细胞凋亡的作用.pdf

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1、198·中华实用儿科临床杂志2015年2月第30卷第3期ChinJApplClinPediatr,February2015,Vo1．30,No．3——··血液／肿瘤疾病·阿伐他汀通过磷脂酰肌醇3一激酶／丝氨酸苏氨酸蛋白激酶／哺乳动物雷帕霉素靶蛋白途径调节HL一60白血病细胞凋亡的作用刘苗石清照姜毅【摘要】目的观察阿伐他汀对白血病细胞HL-60增殖和凋亡的影响，探讨磷脂酰肌醇3·激酶／丝氨酸苏氨酸蛋白激酶／哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K／AKT／mT0R)信号途径在此过程中的作用。方法取对数生长期细胞，分为阴性对照组和实验组(阿伐他汀干预水平分别为1、5、

2、lOtxmol／L)，培养12、24、48h，采用四甲基偶氮唑盐(MTF)法检测白血病细胞的增殖能力；培养48h后，流式细胞术检测白血病细胞凋亡变化，反转录一聚合酶链反应(RT—PCR)和Westernblot方法检测朋、AKT和m加基因表达的变化。结果阿伐他汀对白血病细胞HL-60有明显抑制增殖和促凋亡作用。10~mol／L阿伐他汀对HL-60细胞干预48h后对细胞增殖的抑制作用最强，抑制率达到(39．77±3．01)％，与阴性对照组相比，差异有统计学意义(t=4．016，P<0．O1)，I司时对细胞凋亡的诱导作用最强，凋亡率达到(43．29±3．91)

3、％，与阴性对照组相比，差异有统计学意义(t=3．625，P<0．05)。此外，PI3K、AKT和mTOR在白血病细胞HL-60均有基础表达，10i~mol／L阿伐他汀对HL-60细胞干预48h后，PI3K、AKT和mTOR基因mRNA表达水平下调最为明显，分别下降了(37．05±4．11)％、(53．79±3．27)％、(40．63±2．42)％，与阴性对照组比较差异均有统计学意义(t=4．805、3．799、4．312，P均<0．05)，同时对PI3K、AKT和mTOR蛋白表达水平下调最为明显，分别下降了(41．09±3．17)％、(45．674-2．9

4、2)％和(63．414-3．59)％，与阴性对照组比较差异均有统计学意义(t：3．576、4．727、4．902，P均<0．05)。结论阿伐他汀可能通过PI3K／AK．r／mT0R信号通路抑制白血病细胞增殖并诱导细胞凋亡。【关键词】阿伐他汀；白血病；细胞凋亡；磷脂酰肌醇3一激酶／丝氨酸苏氨酸蛋白激酶／哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路EfectofAtorvastatinonapoptosisofHL一60leukemiccellsviatheregulationofthephosphatidylinositol3一kinase／serine／threoninep

5、roteinkinase／mammaliantargetofrapamycinsignalingpathwayMMiao．Qingzhao，JiangYi．DepartmentofPediatrics，WuhanUniversity，RenminHospital，Wuhan430060，ChinaCorrespondingauthor：JiangYi．Email：jiangyiwd@126．com【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectofAtorvastatinontheproliferationandapopt

6、osisofleukemicHL一60一cellline，andtoexplorethepossibleroleofph0sphatidvlin0sitol3一kinase／serine／threonineproteinkinase／mammaliantargetofrapamycin(PI3K／AKT／mT0R)signalingpathwayinthisprocess．MethodsHL一60cellswereincubatedwithdifferentconcentrationsofAtorvastatin(1，5，10i~mol／L)，andHL一

7、60cellswithoutanytreatmentwereusedascontrols．TheproliferationofHL一60whichwasinvestigatedbyfourmethylthiazolyltetrazoliumassaywhencellswereculturedfor12．24．48hours．Theapoptosiswasdetectedbyflowcytometryaftercellswereincubatedfor48hours．ThemRNAandproteinexpressionsofAKT．PI3KandmT0Rw

8、eredetectedbyreversetranscription