沉默GSTs基因影响棉铃虫对甲氧虫酰肼的敏感性.pdf

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1、艋杨保2015．41(2)：49—54PlantProtection沉默G基因影响棉铃虫对甲氧虫酰肼的敏感性徐希宝，张靖，芮昌辉(中国农业科学院植物保护研究所，农业部作物有害生物综合治理重点实验室，北京100193)摘要利用RNAi技术对GSTs基因进行沉默处理，明确了沉默棉铃虫GSTs基因可以影响其对甲氧虫酰肼的敏感性。结果表明，通过饲喂siRNA在1d内就可以有效干扰GSTs基因表达，进而降低了GSTs酶活性；停止饲喂siRNA后，RNA干扰效果并不会立刻消失；沉默GSTs基因后，棉铃虫对甲氧虫酰肼的敏感性显著提高。关键词甲氧虫酰肼；棉铃虫

2、；谷胱甘肽S一转移酶；RNA干扰；实时定量PCR中图分类号：Q965．9文献标识码：ADOI：10．3969~．issn．0529—1542．2015．02．008EffectsofsilencingGSTsgenesonthesusceptibilityofHelicoverpaarmigeratomethoxyfenozideXuXibao，ZhangJing，RuiChanghui(InstituteofPlantProtection，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，KeyLaboratoryof

3、IntegratedPestManagementinCrops，MinistryofAgriculture，Beqing100193，China)AbstractGSTsgenesinHelicoverpaarmigeraweresilencedbyRNAitechniqueandtheeffectsofsilencingGSTsgenesonthesusceptibilityofH．armigeratomethoxyfenozidewereinvestigated．Theresultsshowedthattheex—pressionlevel

4、ofGSTsgenesmarkedlyreducedfromthefirstdaybyfeedingsiRNA，andthenthespecificactivi-tiesofGSTsreduced．TheeffectofsilencingwouldnotdisappearimmediatelyafterstoppingfeedingsiRNA．ThesusceptibilityofH．armigeratomethoxyfenozideincreasedafterGSTsgenesbeingsilenced．KeywordsmethOxyfenO

5、zide；Helicoverpaarmigera；glutathioneS—transferase；RNAi；qRT—PCRRNA干扰(RNAinterference，简称RNAi)是对甲氧虫酰肼的抗药性机理研究，刘娟等_6]与任龙指由双链RNA(doublestrandRNA，dsRNA或等E]的研究表明棉铃虫对甲氧虫酰肼的抗性形成与smallinterferingRNA，siRNA)引发生物体同源序谷胱甘肽S一转移酶(GSTs)活性提高关系密切。列mRNA降解而最终导致特异性基因转录后沉默研究发现，与GSTs相关联的多种昆虫对杀虫的效应l_

6、1]。近年来，RNAi通过干扰靶标基因表达，剂抗性的分子机制是GSTs基因表达量的增加。在在昆虫功能基因、害虫抗药性机制研究和害虫防治埃及伊蚊DDT抗性品系中，存在两种免疫学不同的方面取得了一定成果r2]。GSTs基因GST-la和AaGSTDl过量表达L8J。在甲氧虫酰肼(methoxyfenozide)是由罗姆一哈斯冈比亚按蚊DDT抗性品系中AgGSTE2—2基因在公司(Rohm-Hass)研究开发的一种双酰肼类昆虫生mRNA和蛋白水平上都过量表达【9]。果蝇的DDT长调节剂类杀虫剂，对鳞翅目害虫均具有高度的选抗性种群中DmGSTD1蛋白过

7、量表达，并且能够代择杀虫活性l_3]。甲氧虫酰肼与蜕皮激素(20一羟基谢DDTl1。。。在褐飞虱拟除虫菊酯抗性品系中一个蜕皮酮)类似，不同点在于，甲氧虫酰肼一旦与蜕皮Delta类GST基因NIGSTD1的重组蛋白表现出高激素受体结合就很难分离，而持续诱导蜕皮反应，并的过氧化物酶活性，并且抗性品系中NzGSTD1通且昆虫无法合成新表皮，最终死亡_4]。有关棉铃虫过基因扩增实现过量表达[1。小菜蛾对甲基对硫收稿日期：2014—03—06修订日期：2014—05—19基金项目：国家“863”计划主题项目(2O12AA1015027)；公益性行业(农业

8、)科研专项(201203038)*通信作者E-mail：chrui@ippcaas．cn·50·i氢钧慷婚2015磷的抗性与一个GST基因(PxGST