蕨类植物石蜡切片制作技术探讨.doc

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1、蕨类植物石蜡切片制作技术探讨　　摘要：石蜡切片是一种常规的生物组织形态结构研究手段。由于蕨类植物不同世代的样本具有显著差异，仅依常规流程进行石蜡制片与切片，往往不能达到预期的效果。在实际操作中，操作者会遇到一些书本上没有答案的难题，从而影响试验的进程与操作。试验以荷叶铁线蕨为材料，探讨了蕨类植物石蜡切片的制作流程，并针对在常规石蜡切片中易出现的问题进行了探讨，提出了相应的解决方法。　　关键词：石蜡切片；蕨类植物；荷叶铁线蕨　　中图分类号：Ｑ－３３６；Ｑ９４９．３６＋７．２文献标识码：Ａ文章编号：0439－８11418－3767-03　　　

2、　StudyontheTechniqueofMakingParaffinSectionofFern　　　　ＷＵＨｕａ，ＣＨＥＮＰｉｎｇ－ｔｉｎｇ，ＹＵＡＮＬｉｎｇ，ＸＵＹｏｎｇ-ｒｏｎｇ，ＣＨＥＮＬｏｎｇ－ｑｉｎｇ　　　　　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓ，ｅｍｂｅｄｄｉｎｇａｎｄｓｅｃｔｉｏｎｏｆｐａｒａｆｆｉｎｓｅｃｔｉｏｎｗｅｒｅｕｓｕａｌｌｙｐｅｒｆｏｒｍｅｄｉｎｐｌａｎｔｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｔｕｄｉｅｓ．Ｈａｎｄｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｃｏｕｌｄｂｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｒｏｕｔｉｎｅｐｒｏｃｅｄｕｒ

3、ｅ，ｂｕｔｔｈｅｅｘｐｅｃｔｅｄｒｅｓｕｌｔｓｍｉｇｈｔｎｏｔｂｅｏｂｔａｉｎｅｄｂｅｃａｕｓｅｏｆｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｉｓｓｕｅｃｈａｒａｃｔｅｒｓｏｆｆｅｒｎｓ．Ｉｎｔｈｅｃｏｎｃｒｅｔｅｏｐｅｒａｔｉｏｎｓ，ｓｏｍｅｐｒｏｂｌｅｍｓｗｈｉｃｈｗｅｒｅｎｏｔｍｅｎｔｉｏｎｅｄｉｎｂｏｏｋｓｍｉｇｈｔｄｉｓｔｕｒｂｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｅｓ．TheｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓofmakingparaffinsectionwassimplifiedｕｓｉｎｇＡｄｉａｎｔｕｍｒｅｎｉｆｏｒｍｅＬ．ｖａｒ．ｓｉｎｅｎｓｅＹ．Ｘ．Ｌｉｎａｓｍａｔ

4、ｅｒｉａｌ．Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙｓｏｍｅｃｏｍｍｏｎｐｒｏｂｌｅｍｓandcorrespondingsolutionｄｕｒｉｎｇｔｈｅｒｏｕｔｉｎｅｗａｙwereputforward．　　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐａｒａｆｆｉｎｓｅｃｔｉｏｎ；ｆｅｒｎ；ＡｄｉａｎｔｕｍｒｅｎｉｆｏｒｍｅＬ．ｖａｒ．ｓｉｎｅｎｓｅＹ．Ｘ．Ｌｉｎ　　　　石蜡切片是进行动植物形态发育和内部构造研究的重要技术与手段［１－４］。一张结构完整、厚薄适当、平整、染色清晰、反差强、透光性好的高质量石蜡切片的获得，与整个石蜡切片制作过程中的各个环节都有着紧密的联系。不同

5、的材料有着不同的特性，在具体制作时，针对不同的材料需要摸索和探讨相应的处理时间与条件，不断地改进和完善。除此以外，在具体的操作中还有许多的注意事项或技巧，如固定材料抽真空时，如何使材料保持在固定液内，不因剧烈的压强变化而使细胞或结构受损；如何避免在固定和脱水换液过程中，空气又回到组织结构间隙较大的材料里；如何快速高效的使蜡带展平，等等。蕨类植物是介于低等植物与高等植物之间的过渡型植物群体，它的生长和发育模式对研究植物的进化与起源有着重要的意义和价值。早在２０世纪５０年代初，人们就开始对蕨类植物配子体的形成和发育进行了大量的显微观察研究。但

6、是国内有关如何具体的制作蕨类植物石蜡切片的文章报道甚少，教科书中也较少提及。荷叶铁线蕨是我国特有的濒危保护植物，仅分布于长江三峡流域的少数地区［５，６］，具有配子体含水量高、孢子体叶片革质、走茎表面附属物多等特点，按常规的制片方法，难以获得符合质量要求的切片［７，８］。试验以荷叶铁线蕨为材料，基于常规的石蜡切片技术，根据对比试验改善了石蜡切片制作基本流程中的一些操作环节，并对一些常见的问题提出了具体可行的解决方法，现将结果报告如下。　　１材料与方法　　１．１材料　　植物材料为荷叶铁线蕨原叶体、原叶体愈伤组织、孢子体叶片、走茎、根等。试剂主

7、要有纯石蜡、ＦＡＡ固定液、无水乙醇、乙醇、１％醇溶性伊红、氯仿、二甲苯、蛋清甘油、加拿大树胶、国产中性树脂等。仪器主要有展片台、恒温烘箱、生物显微镜、真空仪等。　　１．２方法　　１．２．１固定常规的固定是将所需器官或组织剪切好后，投入装有约为材料体积２０倍的ＦＡＡ固定液的安瓿瓶中，随即抽真空。本试验基于常规的固定方法，抽真空前在安瓿瓶内放置了一个适度大小的铜网，使得材料拦于铜网之下，离固定液上层适当距离，而后抽真空。　　１．２．２脱水及透明一般的脱水及透明在每级需要时间２～３ｈ［９］。试验基于常规的操作步骤，在替换脱水剂后适当地进行抽真空

8、，并根据不同的材料含水情况与结构特点，适当地缩短了每级脱水及透明药剂的处理时间。具体操作如下，在３０％～５０％的乙醇梯度脱水阶段，每级需时０．５ｈ；从７０％～８５％的乙醇梯度脱水阶段，每级１ｈ