实验 __DNA的粗提取与鉴定.doc

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1、生物选修三学案编审教师：邢秀芝班级：姓名：序号：实验DNA的粗提取与鉴定教学目的1．初步掌握DNA粗提取和鉴定的方法。2．观察提取出来的DNA物质。实验原理1．DNA在NaCl溶液中的溶解度是随NaCl的浓度变化而改变的。DNA在0．14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低，据此可使DNA充分溶解而使杂质沉淀或DNA沉淀而杂质溶解。2．DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些物质可以溶于酒精溶液，据此可提取杂质较少的DNA。3．DNA对蛋白酶、高温和洗涤剂（可以溶解细胞的细胞膜，除去脂质和蛋白质，而对DNA没有影响）都具有较好的耐性。4

2、．DNA＋二苯胺蓝色（用于DNA的鉴定）实验材料：鸡血细胞液（5-10ml），体积分数为95%的酒精溶液（冷却），蒸馏水，质量浓度为0.1g/ml的柠檬酸钠溶液(抗凝剂)，物质的量浓度分别为2mol/l和0.015mol/l的氯化钠溶液，二苯胺试剂实验步骤1．材料制备0.1g/ml柠檬酸钠100ml置于500ml烧杯内→玻璃棒搅拌→1000r/min离心2min→吸去上清液→即得鸡血细胞液（也可将上述烧杯置于冰箱中，静置一天使鸡血细胞自行沉淀）活鸡血180ml[思考]为什么要除去血液中的上清液？2．方法步骤5生物选修三学案编审教师：

3、邢秀芝班级：姓名：序号：取血细胞液5-10ml＋20ml蒸馏水，玻璃棒沿一个方向快速搅拌，使血细胞加速破裂，纱布过滤，滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质（1）提取鸡血细胞的细胞核物质原理：血细胞吸水胀破，玻璃棒快速搅拌机械加速血细胞破裂（2）溶解核内DNA：滤液＋2mol/LNaCl溶液40ml，玻璃棒沿一个方向搅拌（3）析出含DNA的粘稠物：向上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向搅拌，出现丝状物，当丝状物不再增加时，停止加水（此时NaCl溶液相当于稀释到0．14mol/L）（4）滤取含DNA的粘稠物：用多层纱布过滤，含D

4、NA的粘稠物留在纱布上（5）DNA粘稠物再溶解：在50ml的烧杯中注入20ml2mol/L的NaCl溶液，缓慢搅拌3min使上述粘稠物尽量多的溶解在溶液中。（6）过滤含DNA的2mol/LNaCl溶液：用2层纱布过滤，滤液中含DNA（7）提取含杂质较少的DNA：上述溶液＋冷却的95%的酒精50ml，缓慢搅拌，出现乳白色丝状物，用玻璃棒将丝装物卷起。（8）DNA鉴定：【思考】1.上述过程中两次加入蒸馏水，两次加入的作用一样吗？为什么？5生物选修三学案编审教师：邢秀芝班级：姓名：序号：2.用纱布过滤了几次？每次的目的是什么？（你要保留滤

5、液还是纱布上的物质）3.有几个步骤中用到了搅拌？每一次的目的是什么？4.DNA的直径约为2nm，实验中出现的丝状物的粗细是否就表示一个DNA分子直径的大小？【实验关键】本实验成功的关键是获取较多、较纯净的DNA，因此应注意：1．充分搅拌鸡血细胞液。DNA存在于鸡血细胞核中。将鸡血细胞与蒸馏水混合以后，应用玻璃棒沿一个方向快速搅拌，使血细胞加速破裂，并释放出DNA2．沉淀DNA必须用冷酒精。实验前必须准备好大量95%的酒精，并在冰箱中（5℃以下）至少存放24小时。3．正确搅拌含有悬浮物的溶液。在第（3）、（5）步骤，玻璃棒不要直插烧杯

6、底部，且搅拌要轻缓，以便获得较完整的DNA分子。在步骤（7），要将玻璃棒插入烧杯溶液中间，用手缓慢转动5-10min。【补充】１.也可使用菜花或洋葱做实验材料，只不过实验成功率较低，实验效果与研磨液关系密切。（1）取新鲜植物组织（菜花）放置于冰箱中冷却1~2天（2）取30克植物组织,切碎,置于研体中,倒入10ml研磨液,充分研磨10分钟（3）将研磨液置于离心管中，在1000r/min的转速下离心2~3分钟，取上清夜置于冰箱中冷却几分钟（4）取1倍体积的上清液，加入2倍体积的95%的冷酒精当中，用玻棒轻轻搅拌，沉淀3~5分钟后可见白色

7、絮状DNA缠绕于玻棒末端。（5）鉴定（略）5生物选修三学案编审教师：邢秀芝班级：姓名：序号：【思考】用菜花代替鸡血作为实验材料，其实验操作步骤完全相同吗？为什么？2.在学生实际的实验过程中，在水浴后15分钟内出现明显实验现象的比例往往非常低，经常会出现整个班级没有明显鉴定结果的现象。根据实际操作的结果，很可能的原因是：在实验过程中，经常会出现缠绕于玻璃棒末端的DNA的量过少的情况，如果溶解于氯化钠溶液中的DNA的量过少的话，与过量的二苯胺试剂共热时，出现的蓝色会比较浅。【总结】1.提取生物大分子的基本思路是：选用一定的物理或化学的方

8、法分离具有不同物理化学性质的生物大分子。2.破碎细胞获取DNA滤液的方法有：在鸡血细胞溶液中加入蒸馏水，用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液；或者在切碎的洋葱中加入洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液3.去除DNA滤液中杂质的