抗P-选择蛋白人源性单克隆抗体的制备.pdf

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1、生物技术通讯LETI'ERSINBIOTECHNOLOGYVo1．21No．6Nov．，2010827doi：10．3969~．issn．1009—0002．2010．06．018研究报告抗P一选择蛋白人源性单克隆抗体的制备李鹤一，王双，林建波，孙志伟，何建勇1．军事医学科学院生物工程研究所，北京100071；2．沈阳药科大学，辽宁沈阳110016[摘要]目的：获得人源性抗P一选择蛋白(selectin)特异性抗体，为相关疾病治疗奠定基础。方法：在HEK293细胞中真核分泌表达人P一选择蛋白功能性片段，以

2、此蛋白片段作为抗原，利用本室构建的大容量全合成人源性噬菌体抗体库进行筛选，经过3轮固相筛选后，阳性克隆得到富集；将其中富集效果最好的一株单链抗体A1改造成全抗体(IgG1)，重组质粒转染H293细胞后，抗体得到表达；表达后在全抗体水平上用ELISA和Western印迹分别验证了A1抗体的特异性，并通过非竞争ELISA方法初步测定这株抗体的亲和力。结果：3轮筛选得到3株特异性噬菌体抗体，其中富集效果最好的单链抗体A1改造成全抗体形式后特异性良好，抗体亲和力Kd=2x10mol／L。结论：筛选得到一株特异性较

3、好的抗P一选择蛋白人源性单克隆抗体A1，其特异性和亲和力较好，有继续开发的价值。[关键词]P一选择蛋白；真核表达；噬菌体抗体；筛选；特异性；亲和力[中图分类号]R392．1；Q78[文献标识码]A[文章编号]1009—0002(2010)06—0827—07ThePreparationofHumanAnti-P-SelectinMonoclonalAntibodies，WANGShuan~，LINJian-Bo，SUNZhi-Wei，HEJian-Yon~1．BeijingInsitituteofBiot

4、echnology，Beijing100071；2．ShenyangPharmaceuticalUniversity，Shenyang110016；China[Abstract]Objective：Toobtainanti-humanP-selectinmonoclonalantibodies，andlayabasisforthetherapyofP-selectinrelateddiseases．Methods：P-selectinfunctionalsegmentwasexpressedsecretl

5、ybyHEK293cells，whichwasusedasantigenforantibodypanning．Andthenscreeningfromthelargefullysynthetichumanantibodylibraryconstructedinourlab，severalcandidatesofantibodiesspeciallybindingtoP-selectinwereobtained，after3roundsofsolidpanning，thepositivecloneswere

6、enriched．Next，onecandidatesA1，whichwasenrichedsuffi—ciently，wastransferredfromscFvtowholeantibody(IgG1)．Atlast，usingELISAandWesternblottoidenti~thespecificityofA1．Alsousingnon-competitiveELISAmethodtodetectetheaffinityofA1．Results：Afterpanning，wegot3difer

7、entcandidates，andchangedoneofthemintowholeantibodyform．TheELISAandWesternblotresultsshowedthatthespecificityofA1wasexcellent．Furthermore，theaffinityofA1wasdetectedbynon-com—petitiveELISAmethodandtheaffinityconstantI(dwas2x10mol／L．Conclusion：Wegotanexcelle

8、ntanti—hu—manP—selectinantibodycandidant，whichprovedtohavewellspecificityandaffinity，SOithaspotentialvaluetogoonstudy．[Keywords]P-selectin；eukaryoticexpression；phagedisplayedantibody；specificity；afinityP一选择蛋白(select