抗犬细小病毒卵黄抗体制备与临床应用初探.pdf

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1、·32·兽医研究LIvEsTOCKANDPoULTRYINDusTRYNo26o滤取上清。试验4组：用HCI调节pH至抗犬细小病毒卵黄抗体制备4．4，按总量0．5％加人羟丙基甲基纤维素(HPMC)，放在冰箱一40℃冻融2次，与临床应用初探离心20min，过滤取上清。1．2．2有机溶剂抽提法：取lI5稀释的卵朱向红齐红燕汪毅z黄水溶液30mL．按3：1]Jt1人氯仿10mL，(1．上海金山区农产品检测中心，上海201500；2．上海交通大学农业与生物学院)充分振摇。在室温放置20min，4~C中图分类号：$858．8文献标识码：A文章编号：100

2、8—0414(2010112—0032—033000rpm离心20min，过滤取水相。1-2．3聚乙二醇(PEG6000)法：取1：5摘要试验采集CPV病料，提纯病毒，制成强化油乳荆疫苗，免疫经产母稀释的卵黄水溶液30mL，按总量3．5％加鸡。免疫卵中含有高滴度的抗CPv血凝抑制抗体。经苯酚液初提和硫酸铵盐析，5入PEG1．05g，充分振摇。4~C3000rpmmL卵黄混合液可得IgY26．37mg。制备的-~CPVIgY卵黄抗体口服制剂安全可靠，离L,20min，过滤取水相。按水相总量临床治疗82例CPV感染病例，治愈74例，治愈率迭90．2

3、4％，对3月龄以内发病早期病12％3J~人PEG，充分振摇．代3000rpm犬治愈率高达95．23％。离心2Omin。取沉淀。关键词犬细小病毒卵黄抗体1：7服制剂1．2．4苯酚法：取1：5稀释的卵黄水溶犬细小病毒感染是犬最常见的传重量l：1力Ⅱ无菌生理盐水研磨，离心去液30mL．再按照1：1的比例加入4％苯酚染病之～．其发病率与死亡率高达沉渣，上清20000rpm离心60rain，取液30mL．充分振摇。然后4~C3000rpm5O％一100％，严重影响犬的健康。近年上清按总量的10％加入氯仿，剧烈振离f~,20min，过滤取上清。来，随着城乡

4、宠物犬和肉用犬饲养数荡，离心取上清按总量的1O％加入洗1．3IgY提纯与口服制剂制备量的增加．该病的发病率呈上升趋势。涤后的戊二醛化猪红细胞，摇匀4~C放1．3．1IgV提纯：采用饱和硫酸铵法。目前对患病犬一般采用对症和支持治置2h，离心取沉淀，用4％的盐水配制第一次提纯用50％饱和度．第二次用疗，治愈率很低，尤其是对2～3月龄幼成1O％的红细胞悬液，37℃2h，离心33％饱和度。提纯~JlgY溶入少量无菌犬效果更差。有报道用犬和异种动物取上清，血凝(HA)效价达1：4o96以水中，放人透析袋中流水透析除盐。利驴等制作抗病毒血清。将提纯的抗上，

5、用市售的CPV标准阳性血清做血用紫外分光光度计测定抗体含量。CPV的血清球蛋白注射液用于治疗患凝抑制试验(HI)进行验证，取上述病1．3．2IgY~J服制剂制备：将提纯测定病犬，取得了一定的效果。毒液经甲醛灭活后加入褐藻多糖(上含量后的I用无菌水配制成2mgmL，自1893年Klemperer首次报道鸡海水产研究所提供，针剂50mg／mL)使封装在安培瓶中，每瓶6mL，放入65℃蛋中存在抗体以来，卵黄抗体(IgY)的每mL液体含4mg，制备成强化油乳剂水浴箱中20rain进行处理。待冷却后研究不断深入。目前在I的形成、生疫苗。取样进行口服安全性

6、试验、HI效价测物学特性等方面取得较大的进展，并1．1-2免疫：将制备的CPV强化疫苗定及细菌学检验。合格后即为抗CPVRIgY作为诊断试剂和防治药物的研免疫40周龄罗曼蛋鸡，笼养，产蛋率卵黄抗体口服制剂。究愈来愈受到关注。近年来国外已制80％以上。免疫剂量每头份肌注O．51．3．3IgYEl服制剂安全性试验：取实备了针对不同抗原的IgY，如轮状病mL，间隔10d进行第二次免疫，免疫剂验级小白鼠20只(体重15g左右)，分3毒、流感病毒、大肠杆菌、人胰岛素、人量为lmL。免疫14d后，对采取血样与组，试验1组每次口I~IgY制剂0．5mL。每大

7、肠杆菌等。IgY具有产量高，价格低卵黄提取IgY进行HI效价测定，当效价天2次，连续口服4mL，并继续观察4mL廉．不会产生抗药性等突出优点．有着达1：256以上时收集免疫卵，效价低于有无异常反应后剖检。试验2组每次口广泛的开发前景。1：128时进行第三次免疫．免疫剂量为服lgY制剂剂量改为1mL。第三组为对本试验从临床确诊为CPV感染的1mL，14d后收集免疫卵。照组。剖检实验小白鼠主要检查心、病死犬中采集病料，经病毒提纯后制1．2IgY的提取肝、脾、肺、肾等实质器官及消化道有成强化油乳剂苗免疫经产母鸡，从免1-2．1水稀释法：在无菌条件r取

8、无眼观病理变化。疫卵中提纯IgY制成口服制剂，并对临卵黄混合液50mL，]Jtl／kpH7．O无菌水1．3．4IgYlZl服制剂的效检和保存期床上CP