抗人神经肽Y单克隆抗体的制备及鉴定.pdf

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1、旦际耋笙医学杂志2011年7月第32卷第4期IntJGenatr，July201l，v01．32No．4一145一@2011国际老年医学杂志编辑部@2011bytheEditorialOfficeofInternati0naIJouIna10fGeriatrics，’””_卜”““””’+”一．”、：原著：++++++++．．+．抗人神经肽Y单克隆抗体的制备及鉴定丁克祥h董萍杨永鹏孙乐孙哲尹睛韩晋云左夏林丁宇丁振华南方医科大学(原第一军医大学)，广州5105l5中国大连市董萍医疗美容整形医院，大连116011中国京天成生物技术(北京)有限公司，北京100085中国华中科技大学同济医学院同济

2、医院，武汉430030中国南方医科大学公共卫生学院及热带医学学院，广州510515中国摘要目的：建立抗人伸经肽Y(NPY)的单克隆抗体细胞株。方法：用合成的hNPY多肽偶联KLH免疫BALB／e小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／O融合，用ELISA法筛选出阳性克隆，经克隆化后建立抗人NPY杂交瘤细胞株，并对得到的单抗进行亚类、效价、纯度、亲和常数以及结合位点的测定和分析。结果：获得了3株稳定分泌抗hNPY单抗杂交瘤细胞株，lgG亚类鉴定分别为IgG3、IgG2b、IgG1，腹水效价为1：20万～1：200万，纯化抗体效价为0．05tLg／ml～0．0005g／ml，4A8抗体纯度达到95

3、％以上，抗体亲和常数分别为5．27×10。lJmol、3．39×10L／mol、1．05×10L／tool，不同单抗配对经时间分辨免疫荧光法检测结果提示3株单抗是针对不同抗原决定簇。结论：成功制备了3株抗hNPY单抗，为研究NPY及其抗体在脂肪移植及肥胖治疗中的机制和应用奠定基础。关键词人神经肽Y；多肽合成；BALB／c小鼠；单克隆抗体；制备；鉴定doi：10．3969／j．issn．1674—7593．2011．04．001PreparationandIdentificationofMonoclonalAntibodyAgainstHumanNeuropeptideYDingKexian

4、g，DongPing。YangYongpeng，SunLe。SunZhe，YinQing。，，HanJinyun，ZuoXialin，DingYu，DingZhenhuaSouthernMedicalUniversity，Guangzhou510515ChinaDongPingCosmeticPlasticSurgeryHospital，Da'lian116011，ChinaAbMaxBiotechnologyCo．Beijing100085，ChinaTongjiHospita1．TongjiMedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceandTec

5、hnology，Wuhan430030，ChinaScho01ofPublicHealthandTropicalMedicine，SouthernMedicalUniversity，Guangzhou510515，ChinaCorrespondingauthors：DingZhenhua，E—mail：dingzh@fimmu．eom；DingKexiang，E—mail：limylion@fimmu．cornAbstractOBJECTIVE：Toproducemonoelonalantibodies(McAb)againsthumanneuropeptideY(hNPY)．METHOD

6、S：TheBALB／cmousewereimmunizedwithsyntheticpeptidehNPYcoupledtoKLH．TheimmunizedmousespeleencellswerefusedwithSP2／0ce11st0raisemonoclonalhybridomacelllines，andtheculturesupernatantsofhybridomaswerescreenedbyELISAmethodagainsthNPY．Themon0clonalantibodieswerefurthercharacterizedbyexaminationsoftheirim

7、munoglobulinclassorsubclass，va一1ence，putity，a瓶nityconstantsandbindingsites．RESULTS：ThreehybridomasproducingantibodiesagainsthNPYwereobtained．IgGisotypesofthethreeMcAbwereIgG3，IgG2bandIgG1respectively．Thetitersoft