流行性乙型脑炎病毒重组E蛋白的纯化及多克隆抗体制备.pdf

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1、泸州医学院学报2011年第34卷第5期530JournalofLuzhouMedicalCollegeVo1．34No．52011流行性乙型脑炎病毒重组E蛋白的纯化及多克隆抗体制备木罗波，毛樱逾，龚舒，王丽，李洪(泸州医学院：生物化学教研室；病原生物学教研室；基础医学研究中心。四川泸州646000)摘要目的：纯化原核表达的JEVE蛋白并制备其多克隆抗体。方法：IPTG诱导大肠杆菌表达IEvE蛋白，Ni—NTA亲和层析纯化。将纯化后的JEvE蛋白免疫新西兰兔，制备多克隆抗血清。琼脂糖双向扩散实验及间接ELISA检测抗体效价。结果：

2、获得浓度1．85mg／ml、纯度92％的JEVE蛋白，并制备了JEVE蛋白兔多克隆抗体血清。琼脂糖双向扩散实验显示多克隆抗体血清1：16稀释时仍能观察到沉淀线，间接ELISA法显示1：200稀释时具有较高效价。结论：纯化了『EvE蛋白，并制备出了多克隆抗体。关键词IEV；E蛋白：多克隆抗体中图分类号R392．7文献标识码A文章编号1000—2669(2011)5-0530—04PURIFICATIoNoFJAPANESEENCEPHALITISVIRUSEPRoTEINANDPREPARATIoNoFTHEPoLYCLoNALA

3、NTIBoDYLuoBo．etalDepartmentofBiochemistry,LuzhouMedicalCollegeAbstractObjective：TopurifyJEVEproteinexpressedinE-coliandprepareitspolyclonalantibody．Methods：JEVEproteinexpressedinE-coliinducedbyIPTGwaspurifiedbyNi-NTAchromatographyandwasutilizedtoimmuneNew-Zealandrabb

4、itstoachievebloodserumofpolyclonalantibody．DoubelimmunodifusiontestandindirectELISAexperimentwereusedtodetectantibodytiter．Results：TheconcentrationofJEVEpro—teinwas1．85mg／mlandthepuritywas92％．Whentheachievedpolyclonalantibodywasattenuatedaccordingto1：16，precipitation

5、linewasstillfoundindoubelimmunodiffusiontest．Thepolyclonalantibodyhadhightiterwhenitwasattenuatedaccordingto1：200．C0ncIusiOn：JEVEproteinanditspolyclonalantibodywereprepared．KeywordsJEV；Eprotein；Polyclonalantibody流行性乙型脑炎(Japaneseencephalitis，JE)简称JEV中的囊膜糖蛋白fE蛋白)是病毒表面最

6、重乙脑，是由乙型脑炎病毒(JEv)引起的以中枢神经系要的成分，由它形成表面抗原决定簇，具有血凝活性统损害为主的急性传染病。主要分布在亚洲和太平和中和活性，能刺激产生中和抗体，从而保护机体免洋地区，我国疫情较严重，占世界总发病数的80％以受病毒攻击[21。可作为理想的免疫学诊断指标。因此，上。爆发型乙脑病情急，病死率可高达25％，存活者我们在前期工作的基础上[31，纯化了JEVE蛋白，并近半数留有不同程度的神经精神后遗症lll。目前，本制备出了多克隆抗体。病尚无特效疗法。早期准确的诊断和有效的预防是1材料与方法防治本病的主要手段。

7、1．1材料$网J1I省科技厅支撑计划项目(2009SZ0117)；四川省教育厅溶菌酶和分子量标准蛋白为Sigma公司产品，重点课题(2006ZD019)Ni—NTA亲和层析柱为QIAGEN公司产品，IPTG为作者简介：罗波(1976一)，男，讲师，硕士Biom0l公司产品，CFA及IFA为SIGMA公司产品，通讯作者：李洪(1957一)，男，教授，硕士生导师第5期罗波等：流行性乙型脑炎病毒重组E蛋白的纯化及多克隆抗体制备531宁波新芝的超声细胞破碎仪，新西兰兔由泸州医学1．0mol／L和0．5mol／L尿素的复性液在4~C低温下

8、透院实验动物中心提供．Blgold／pET一32a／JEV为本室析，通过逐步降低透析液中尿素浓度进行蛋白复性，前期制备[31。JEVE蛋白阴性和阳性血清由本实验室即得可溶性复性蛋白。然后，用PEG8000进行浓保存。缩，用Bradford比色法测定蛋白含量。复性