王亚文——白假丝酵母菌临床分离株的病性及耐药结果分析-.ppt

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1、1白假丝酵母菌临床分离株的致病性及耐药性研究王亚文2008级临床五年制2一、立项依据与设计思路二、技术路线与方案三、可行性与创新性3研究对象——白假丝酵母菌菌群失调机体免疫力降低异位定植白假丝酵母菌感染4临床难题诊断难，作为正常寄生菌，致病性的检测具有重要意义，现有的检测方法耗时耗力。治疗难，耐药菌住的产生。5研究进展1粘附因子2酸性蛋白酶CandidaAlbicansacidProteinase3形态及表型转换6实验目的验证白假丝酵母菌的酸性蛋白酶活力作为致病性的评价指标的可行性。了解本地区药物敏感情况，希望指导临床用药。7二、技

2、术路线与方案8实验设计思路收集、分离、鉴定致病性研究药敏试验1.收集标本2.菌落培养3.涂片镜检4.显色培养1.蛋白酶活力实验2.粘附性实验药物敏感试验9病原菌分离、培养、鉴定白假丝酵母菌收集临床标本120例转种至显色培养基35℃培养48h，依菌落颜色鉴定镜下可见G+性圆或椭圆形酵母菌，有时可见芽管分离菌落，格兰染色，高倍镜检观察菌落形态，有酵母样念珠菌生长为培养阳性。标本接于沙保弱培养基35℃培养24～72hA、B分为假丝酵母菌菌落C、D分为高倍镜下假丝酵母菌及其厚膜孢子初步形态学鉴定结果ABCD11菌落呈翠绿色为白假丝酵母菌，粉

3、红色为克柔氏假丝酵母菌，灰蓝色为热带念珠菌。80株假丝酵母菌中分离出白假丝酵母菌59株，构成比最高为73.3％图5念珠菌显色培养结果12产酶培养基37℃下培养24h恢复产酶活力菌苔出现一个透明圈，测量菌落及其周围透明环直径。37℃下培养48h菌悬液10μl点种于YGM-牛奶培养基酸性蛋白酶活力实验13阴性白假丝酵母菌产酶率为100%,其中高活力株68%，中活力株20%,低活力株占12%R=透明环直径/菌落直径R>3为高活力，2

4、盐水小鼠死后做病理切片组织研磨液培养。密切观察小鼠生存情况，记录小鼠生存时间菌株经YEPD肉汤活化配制为1.8×108/ml菌悬液健康小鼠随机分4组空白对照组、高中低活力组动物实验步骤15动物实验结果图7鼠肾研磨液培养菌落小鼠肾脏组织研磨液涂片白假丝酵母菌涂片图8鼠肾研磨液显色培养图9小鼠肾、肺、脾病理镜下形态16死亡率平均生存时间（天）高活力组100%1中活力组75%3低活力组25%8空白对照组0＋∞白假丝酵母菌的蛋白酶活力与其致病性呈正相关(p<0.01)表1四组小鼠的死亡率与平均生存时间17药敏试验制霉菌素两性霉素B氟康唑酮康

5、唑伊曲康唑临床常用抗真菌药18药敏试验结果1图10同一菌株对5种抗真菌药物的不同反应判读标准：抑菌环直径≥19mm为敏感≤14mm为耐药19药敏试验结果2表2白色念珠菌对5种抗真菌药物的敏感性20三、可行性与创新性21可行性与创新性实验结果提示在一定范围内酸性蛋白酶可以作为评价白假丝酵母菌致病性的指标。牛奶平板法检测酸性蛋白酶活力具有简单，省时，经济等优点，适于在基层医院推广使用。。了解本地区白色念珠菌的药物敏感情况，丰富了这方面的数据空缺，指导临床用药。22谢谢各位老师，请批评指正！