槐定碱抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症因子分泌及机制.pdf

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1、细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmuno1)2015，31(5585·论著·文章编号：1007—8738(2015)05—0585—05槐定碱抑制脂多糖诱导的RAW264．7细胞炎症因子分泌及机制刘静一，刘瑛，李宾，周娅(宁夏医科大学病原生物学与免疫学系，宁夏~l1)ll750004；湖北省咸宁市中心医院检验科，湖北咸宁437100；。湖北省咸宁市中心医院心血管内科，湖北咸宁437100)[摘要]目的观察槐定碱对脂多糖(LPS)诱导RAW264．7细胞分泌肿瘤坏死因子0L(TNF-)、白细胞介素1p(IL一113)时，对ToH样受体4(TLR4)、c．Jun表达的影响，探讨

2、槐定碱抗LPS分子机制。方法培养RAW264．7细胞，实验分为4组：巨噬细胞对照组，以无血清DMEM孵育细胞；槐定碱处理组，以含31．25ms／L槐定碱DMEM孵育细胞；LPS组及LPS刺激后槐定碱处理组，分别以浓度为100g／LLPSDMEM孵育细胞60min后弃去LPS，而后分别加入无血清DMEM或31．25ms／L槐定碱DMEM继续培养。以上4组分别于处理完毕后5、3O、60、120min收集细胞及培养液。采用反转录PCR检测RAW264．7细胞TLR4、c．JunmRNA的表达，Westernblot法及免疫细胞化学技术检测RAW264．7细胞c—Jun蛋白的表达；ELISA检测培养

3、液中TNF-、IL-1B分泌量。结果槐定碱处理组与巨噬细胞对照组各指标间未见显著性差异；LPS组各时间点RAW264．7细胞的11LR4、c-JunmRNA及c-Jun蛋白表达，培养液中TNF-、IL-1B分泌量均显著高于巨噬细胞对照组，并维持至120min未见下降；LPS刺激后槐定碱处理组显著抑制LPS刺激的RAW264．7细胞11LR4、c-JunmRNA及c—Jun蛋白表达，并减少TNF—ot、IL-1B分泌。结论槐定碱通过抑制TLR4及c—Jun表达，下调LPS诱导的RAW264．7细胞TNF-0L、IL-1B的分泌。[关键词】槐定碱；脂多糖；RAW264．7细胞；TLR4；c．Ju

4、n；TNF-oL；IL一1B[中图分类号]R285．5，R392．5，R392．12[文献标志码]ASophoridinesuppressesinflammatoryRA、64．7cellsanditsmechanismLIUJing一，LIUYing，LIBin，ZHOUYaDepartmentofPathogenicBiologyandImmunology，NingxiaMedicalUniversity，Yinchuan750004；Depa~nentofClinicalLaboratory，DepartmentofCardiology，XianningCenterHospitalof

5、HubeiProvince，Xianning437100，ChinalAbstractJ0bjectiveToobservetheefectsofsophoridineonlipopolysaccharide(LPS)-inducedsecretionoftumornecrosisfactora(TNF-oc)andinterleukin1B(IL-lB)aswellastheexpressionsofToll-likereceptor4(TLR4)andc-JuninRAW264．7celsandexplorethemolecularmechanismofanti-LPSofsophori

6、dine．MethodsRAW264．7celswereculturedanddividedintofourgroups：macrophagecontrolgroup(usingserum·freeDMEMtoincubatecels)．sophofi~necontrolgroup(using31．25mg／Lsophoddine-addedDMEMtoincubatecells)，LPSgroupandsophoridineinterventiongroup(using100ug／LLPSDMEMtoincubatecellsfor60minutes，thenthrowingawayLPS

7、andaddingserum-freeDMEMor31．25mg／LsophoridineDMEMtoincubatecells)．Cellsandculturemediumwerecollectedrespectivelyat5，30，60and120rninutesaftertheabovetreatment．TheexpressionIevelsofTLR4andc-JunmRNAweredetermi