甲基化调节miR-200b的表达及其对胃癌MGC-803细胞增殖侵袭能力的影响.pdf

《甲基化调节miR-200b的表达及其对胃癌MGC-803细胞增殖侵袭能力的影响.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、340TianjinMedJ，April2015，Vo1．43No．4甲基化调节miR一200b的表达及其对胃癌MGC一803细胞增殖侵袭能力的影响郭蓉，宁向红，姜葵，张庆瑜摘要：目的体外研究基因miR一200b发生甲基化的不同程度及其表达量的差异对胃癌细胞MGC一803增殖、侵袭、凋亡及对上皮间质转化的影响。方法以正常胃黏膜上皮细胞GES一1、胃癌细胞MGC一803为研究对象，提取细胞总RNA，逆转录后进行实时荧光定量PCR检测2种细胞系中miR-200b的表达量；亚硫酸氢钠修饰PCR(BSP)法检测miR一200b

2、启动子区甲基化水平。用不同浓度5一氮杂胞苷(5'-Aza—CdR)药物处理MGC一803细胞72h后，同法检测miR一200b的表达量及启动子区甲基化水平变化。根据上述实验结果选择合适的药物作用浓度和时间即(10p,mol／L，72h)作为处理组。通过Transwell侵袭实验观测细胞侵袭能力；流式细胞技术检测细胞周期及凋亡的分布情况；Western-blot检测上皮间质转化(EMT)相关指标E—cadherin、N—cadherin、ZEB1、Slug、基质金属蛋白酶(MMP)9等的表达水平。结果miR一200b在G

3、ES一1中表达量较MGC一803高(P=0．022)。启动子区甲基化水平则与之相反(尸l_0．034)。药物不同浓度作用后的MGC一803细胞系miR一200b表达量有随浓度升高而升高的趋势，作用浓度为10Ixmol／L时miR一200b启动子区甲基化水平较对照组低(P=0．043)。与对照组相比，处理组细胞晚期凋亡数增多；G0／G。期细胞数显著增多，s期显著减少；穿过Transwell小室细胞数显著减少；Western—blot实验表明E—cad．herin表达量升高，N—cadherin、ZEB1、Slug、MMP

4、9表达量降低。结论miR一200b启动子区甲基化程度的不同可以影响其表达量，而miR一200b表达量的异常又与胃癌MGC一803细胞增殖、侵袭能力密切相关。关键词：胃肿瘤；腺癌；细胞凋亡；细胞增殖；DNA甲基化；微RNA一200b中图分类号：R735．2，R349．6文献标志码：ADOI：10．11958／j．issn．0253—9896．2015．04．002MethylationofmiR一200banditsefectsonproliferation．invasionofgastriccancercellIine

5、MGC-803GUORong，NINGXianghong，JIANGKui，ZHANGQingyuDepartmentofGastroenterology，TianfinMedicalUniversityGeneralHospital，Tianfin300052，ChinaCorrespondingAuthorE—mail：zhangqy@tijmu．edu．caAbstract：0bjectiveToinvestigatetheeffectofexpressionlevelandmethylationlevelofm

6、iR一200bonproliferation，invasionandapoptosisofgastriccancercelllineMGC一803invitro．MethodsNormalhumangastricepitheliumcelllineGES—1．andgastriccancercelllineMGC一803cellswereculturedandharvestedtoextracttotalRNA．ThenmiR一200bex—pressionlevelwasexaminedviaq-PCR；Methyl

7、ationinpromoterofmiR-200bwasrevealedbyBisulphitePCR．MGC-803cellsweretreatedwithdifferentconcentrationsof5'-Aza——CdRtotestitseffectonmiR——200bexpressionandmethylationofitspromotor．Theeffectofitstreatmentat10p~mol／Lfor72honinvasion，proliferationandapoptosisofbothc

8、elllinesweredetectedbyTranswellassay，Flowcytometryandapoptosisassayrespectively．ThegenerelatedtoEMT(epithelial—mesen—chymaltransition1suchasE-cadherin，N-cadherin，ZEBl