牛γ干扰素单克隆抗体的制备与抗原捕获ELISA检测方法的建立.pdf

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1、第31卷第12期中国预防兽医学报Vo1．31．NO．122009年12月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineDec．2009牛y干扰素单克隆抗体的制备与抗原捕获ELISA检测方法的建立张月美，陈伟业，葛金英，杨帆，步志高(1．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001；2．东北农业大学，黑龙江哈尔滨150030)摘要：为了建立一种简便、快速、可靠和经济的牛干扰素(BolFN．)的免疫学检测方法，本研究通过杂交瘤技术建立了2株抗rBoIFN．单

2、克隆抗体(MAb)2G6和5F9。Westemblot、抗病毒活性阻断实验表明2株MAb与rBoIFN．有高亲和活性。相加ELISA表明2G6和5F9识别rBoIFN．不同的抗原表位。利用2G6作为捕获抗体，5F9一HRP作为检测抗体建立的抗原捕获ELISA方法可特异性的检测不同系统表达的rBolFN．，而且与rBolFN．、rBoIFN—p不发生交叉反应。该方法的建立为抗原捕获ELISA定量检测BolFN一试剂盒的研制奠定了基础关键词：BolFN一；单克隆抗体；ELISA；检测中图分类号：$852．42文献标识码：A文章编号：1008-0589(2009)12．

3、0953．05DevelopmentofmonoclonalantibodiesagainstBovinegamma—IFNandestablishmentofantigencaptureELISAforbovinegamma—IFNdetectionZHANGYue-mei，CHENWei—ye，GEJin—ying，YANGFan，BUZhi—gao(1．StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVeterinaryResearchInstituteofChineseAcademyofAgncultur

4、alSciences，KeyLaboratoryofVeterinaryPublicHealthofMinistryofAgriculture，Harbin150001，China；2．NortheastAgriculturalUniversity，HarbinI50030，China)Abstract：AnantigencaptureELISAwasestablishedbyutilizinghighaffinitymonoclonalantibodies(MAb)againstBolFN一．Twohybridomas2G6and5F9weredeveloped

5、andconfirmedbywesternblotandantiviralblockingassay．TheadditiveELISAdemonstratedthatthetwoMAbsrecognizeddiferentantigenicregions．AntigencaptureELISAbasedontheseMAbsishighlyspecificandsensitive，provingaquickandreliablemethodfordetectingBolFN一．KeyWOrds：bovinegammainterferon；monoclonalant

6、iboies；ELISA；detection干扰素为II型干扰素(ivy)，主要由激活的TT细胞产生等诸多免疫调节活性，既可单独作为生细胞和NK细胞产生，与I型IFN(OL干扰素、B物制剂应用于一些疾病的防治，又可作为免疫佐干扰素)相比有着多种免疫学和生物学活性，它具有剂，增强疫苗的免疫效果川。内源性IFN．^y水平的促进MHCII类抗原表达，增强APC细胞与T细胞高低在很大程度上可以反应机体的细胞免疫状态，的相互作用、增强T细胞辅助抗体产生和细胞毒性而抗原特异性的IFN．反应则可作为机体针对某种}COrrespOndingauthor收稿日期：2008—12—2

7、9基金项目：国家“攻关”项目(2004BA519A19，2005BA711AIO)；国家“973”项目(2005CB523200)作者简介：张月美(1982一)，女，山东聊城人，硕士研究生，研究方向为分子病毒学与分子免疫学．通信作者：E—mail：zgb@hvri．ac．cn954中国预防兽医学报2009矩特定外来抗原的细胞免疫状态指标。IFN一的免疫注射弗氏不完全佐剂等量抗原(免疫部位及方法同首学检i~．,l(Ivy一^y实验)是在特异性抗IFN．单克隆抗次免疫1。融合前3d腹腔注射相同剂量蛋白(不加体(MAb)基础上建立的用于样本中IFN一定性定量佐剂)加强免

8、疫抗体滴度