小鼠免疫方案.doc

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1、小鼠免疫方案1.将抗原蛋白溶于生理盐水中（可以溶解为0.2mg/mL的抗原溶液）；1.1.与等体积的弗氏完全佐剂双推法混匀（此时抗原浓度约0.1mg/mL）；1.2经腹部皮下多点注射免疫BALB/C小鼠(注射约0.25mL)；1.32周后用等量抗原与不完全弗氏佐剂同上法混匀后免疫；1.4再过1周后连续每周用以上1.3.的方法加强免疫1次(抗原可减半)，共3次；1.4最后一次免疫3d后，可通过断尾取血测血清效价，若达到预期目的，即可放血收集抗血清。免疫时间第一周第三周第四周第五周抗原量0.25ml（CFA）0.25ml（IFA）0

2、.25ml0.25ml2.20-100ug/mouse3.用正常小鼠的血清做阴性对照4.初步实验方案如下：小鼠眼球采血500ul，将血液在37°C恒温箱中放置30分钟，再在4°C放置过夜。用药铲将血凝块从管壁上拨落，将血液转移至塑料离心管中，4°C，10,000g离心10分钟，收集上清液即为抗血清，可在-20°C保存数年。抗血清稀释度：1：100，1：200，1：400，1：800，1：1600，1：3200，1：6400，1：128001.抗原包被板子，10ug/ml,0.1ml/孔，4°包被过夜2、洗涤：每孔250ul洗涤液

3、。洗三次。3、封闭：每孔200ul封闭液，37摄氏度1小时。洗涤液,封闭液和包被液均是含0.1%吐温的PBST4、加入抗体，按比例稀释，每孔100ul，37度1小时。5、洗涤：同上，5次。6、加二抗：每孔100ul，37度1小时，洗涤5次。（这部洗涤比较关键，必须洗干净，否则OD值偏高。如果拍板熟练，也可以不用洗涤）7、显色：加入底物和供氢体。分别50ul避光显色15min8、终止：2mol/L硫酸50ul/孔9、测定：用酶标仪测450nm的OD值。