植物组织中淀粉含量的测定.doc

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1、实验14植物组织中淀粉含量的测定 Ⅰ蒽酮硫酸法一、原理淀粉是由葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，使单糖脱水生成糠醛类化合物，利用蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应，即可进行比色测定。二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料任何植物材料。（二）试剂• 浓硫酸（比重1.84）。• 9.2mol/LHClO4。• 蒽酮试剂，同实验24。（三）仪器设备电子天平，容量瓶：100mL4个、50mL2个，漏斗，小试管若干支，电炉，刻度吸管0.5mL1支、2.0mL3支、

2、5mL4支，分光光度计，记号笔。三、实验步骤1.标准曲线制作同实验24恩酮法。2.样品提取称取50～100mg粉碎过100目筛的烘干样品，置于15mL刻度试管中，加入6～7mL80％乙醇，在80℃水浴中提取30min，取出离心（3000rpm）5min，收集上清液。重复提取两次（各10min）同样离心，收集三次上清液合并于烧杯，置于85℃恒温水浴，使乙醇蒸发至2～3mL，转移至50mL容量瓶，以蒸馏水定容，供可溶性糖的测定。向沉淀中加蒸馏水3mL，搅拌均匀，放入沸水浴中糊化15min。冷却后，加入

3、2mL冷的9.2mol/L高氯酸，不时搅拌，提取15min后加蒸馏水至10mL，混匀，离心10min，上清液倾入50mL容量瓶。再向沉淀中加入2mL4.6mol/L高氯酸，搅拌提取15min后加水至10mL，混匀后离心10min，收集上清于容量瓶。然后用水洗沉淀1～2次，离心，合并离心液于50mL容量瓶用蒸馏水定容供测淀粉用。3.测定取待测样品提取液1.0mL于试管中，再加蒽酮试剂5mL，快速摇匀，然后在沸水浴中煮10min，取出冷却，在620nm波长下，用空白调零测定光密度，从标准曲线查出糖含量

4、（μg）。 四、结果计算式中：C——从标准曲线查得葡萄糖量，μg。VT——样品提取液总体积,mL。V1——显色时取样品液量，mL。W——样品重，g。0.9——由葡萄糖换算为淀粉的系数。 Ⅱ碘-淀粉比色法一、原理对于淀粉含量较少的植株样品，也可采用碘–淀粉比色法。淀粉在加热情况下能溶于硝酸钙溶液中，当碘化钾和硝酸钙共存时，碘能以碘–淀粉蓝色化合物沉淀全部淀粉。将此沉淀溶于碱液，并在酸性条件下与碘作用形成蓝色溶液进行比色。二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料任何植物材料。（二）试剂1．80％硝酸

5、钙溶液。2．0.5％碘液：称5.00g结晶碘和10.00g碘化钾，放入研钵混合干研，然后加10mL蒸馏水研至全部碘溶解，将溶液全部转入1000mL容量瓶定容后，贮于磨口试剂瓶。3．5％含碘硝酸钙溶液：取10mL80％的硝酸钙溶液，加入160mL水再加入3mL0.5％的碘液混匀，现用现配。4．标准淀粉溶液：称取纯淀粉50mg于研钵中，加3mL80％硝酸钙溶液，研细并转移到100mL的三角瓶中，用15mL80％的硝酸钙溶液冲洗研钵，无损地收集于三角瓶中。将三角瓶置于沸水浴中煮沸5min，冷却后全部转入

6、50mL容量瓶中并定容。此液为1mg/mL的淀粉标准液。5．0.1mol/LNaOH。6．0.1mol/LHCl。（三）仪器设备分析天平，研钵，容量瓶，量筒，三角瓶，水浴，小漏斗，电炉，离心机，离心管，试剂瓶。三、实验步骤1．称取1～3g叶片，剪碎放入研钵，加5mL80％的硝酸钙溶液，研磨成糊状移入100mL的三角瓶中，用10mL80％的硝酸钙冲洗研钵，无损地收集于三角瓶中，瓶口盖上小漏斗，在沸水浴上煮沸3～5min（叶片含淀粉少的3min，含淀粉多的5min），使样品中淀粉转变为胶体溶液。2．给

7、三角瓶中加20mL蒸馏水，混合液转入离心管中离心（2000～3000rpm）2～3min，将离心后的淀粉胶体浑浊液移入100mL容量瓶（淀粉含量少时，可移入50mL容量瓶），三角瓶及离心沉淀物用5～10mL热蒸馏水冲洗并同样离心，离心液并入容量瓶中（共洗2～3次）定容，即为淀粉提取液。3．取5～10mL淀粉待测液，加入到盛有2mL0.5％碘液的离心管中，混匀静置15min后离心（3000rpm）5min，弃上清液。沉淀用5％的含碘硝酸钙溶液冲洗两次，向冲洗后的沉淀中加入10mL0.1mol/L的N

8、aOH混匀，将离心管浸入沸水内5min，使沉淀溶解。将溶液转入50mL容量瓶中，加入0.3mL0.5％碘液，用30mL左右的水冲洗并入容量瓶，加入2mL1mol/L的盐酸，用水定容并显色，在590nm波长处测定光密度。4．绘制标准曲线取标准淀粉溶液（1mg/mL）0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于6个离心管中，用80％硝酸钙溶液将各管的体积补足至5mL，再向各管加入2mL0.5％碘液，混匀静置15min后离心，其他操作同样品测定步骤，显色后在590nm波长下测