通过膜分离法纯化猪瘟疫苗的效果分析.pdf

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1、中国兽医杂志2011年(第47卷)第7期25通过膜分离法纯化猪瘟疫苗的效果分析武桂梅，王振辉，张桂荣，刘军(1．吉林农业科技学院动物科学学院，吉林吉林132101；2．吉林正业生物制品股份有限公司，吉林吉林132101)中图分类号：$852．5文献标识码：B文章编号：0529—6005(2011)07—0025—02目前，用于预防畜禽传染病的疫苗都是没有纯率；分别用硫乙醇酸盐培养基(T．G)、酪胨琼脂培养化的。疫苗中含有大量的制苗材料来源的蛋白质及基(G．A)、葡萄糖蛋白胨水培养基(G．P)按文献中抗生素，无疑是接

2、种动物的各种不良反应的过敏原，的方法进行无菌检验。严重干扰疫苗蛋白抗原的免疫应答，大大减少中和1．6纯化浓缩的猪瘟病毒液效力检验L3三组纯抗体的产生，导致一些畜禽个体免疫失败u]。本试化的猪瘟病毒液分别稀释为10、10～、10三个验采用膜分离技术对猪瘟病毒的纯化浓缩，显著提滴度，每个滴度分别用3．0kg左右的健康家兔2高了免疫效果。只，每只家兔耳静脉注射ImL。家兔接种后，每天1材料与方法上下午各测体温1次，48～96h后，每隔6h测体温1．I微滤／超滤管式陶瓷(有机)膜分离系统(型号：1次，根据体温反应和无体温反

3、应兔攻击猪瘟病毒SY—MU一2—500)管式陶瓷膜元件孔径0．80gm、脾淋毒后的体温测定结果，判定纯化浓缩的各组猪0．60m、0．45m、0．22m；管式有机膜元件(改瘟病毒液的最小感染量。良纤维素)5K由本院生物制药实验室提供。1．7纯化浓缩的猪瘟病毒液安全检验l3三组纯I．2猪瘟疫苗病毒细胞培养液吉林正业生物制化的猪瘟病毒液分别进行10倍稀释，分别皮下注射品股份有限公司提供90000mL效力检验不合格体重18~22g小鼠各5只，每只0．2mL；肌肉注射(病毒最小感染量≥1o／mL)的猪瘟细胞培养液及体重350

4、～400g豚鼠各2只，每只1mL，均观察合格的常规猪瘟冻干活疫苗(500头份，批号10d；肌肉注射无猪瘟母原抗体1Okg左右的仔猪20080109)。各4头，每头5mL，饲养观察21d，同时设同批对照1．3试剂与实验动物中国农业科学院哈尔滨兽小鼠5只、豚鼠2只、仔猪4头，按要求饲养在非免医研究所生产的猪瘟阳性血清(批号20080206)、猪疫区，判定结果。瘟阴性血清(批号20080110)、猪瘟正向间接血凝诊1．8纯化浓缩的猪瘟冻干活疫苗成品检验分别断液(批号20080309)、猪瘟病毒脾淋毒(最小感染将三组纯化浓

5、缩合格的猪瘟病毒液添加常规的猪瘟量≤10／mL)均由吉林正业生物制品股份有限公司冻干活疫苗保护剂，按照猪瘟疫苗冻干曲线进行冻提供。仔猪由吉林农业科技学院种猪场提供；健康干制造成品。其成品的无菌检验、效力检验、安全检家兔、小鼠、豚鼠由吉林正业生物制品股份有限公司验分别按1．5、1．6、I．7项进行。健康动物舍提供。1．9纯化浓缩的猪瘟冻干活疫苗成品免疫试验1．4不同膜组合对猪瘟病毒液的纯化与浓缩l_21．9．1仔猪分组与免疫根据试验内容，选用每组膜纯化浓缩处理30000mL不合格的猪瘟病毒28日龄断奶前仔猪8O头(母

6、原抗体平均≤41og。)，细胞培养液，分三组进行：1组(0。80m、5K、0．22随机平均分为4组。第1、2、3组每头仔猪对应接种m)陶瓷(有机)膜过滤器；2组(0．60m、5K、0．22三组纯化浓缩的猪瘟冻干活疫苗1。0头份；第4组Urn)陶瓷(有机)膜过滤器；3组(0．45m、5K、0．22为常规疫苗免疫对照组，每头仔猪接种常规猪瘟活Urn)陶瓷(有机)膜过滤器。先分别用0．80m、疫苗1．0头份，四组免疫仔猪均在相同条件下饲养0．60m、0．45m陶瓷膜过滤杂蛋白，再用5K有90d监测抗体消长规律。机膜浓缩病

7、毒，最后用0．22m陶瓷膜除菌处理。1．9．2抗体测定E7-8]分别于免疫后第0、7、14、1．5杂蛋白去除率与无菌检验l2三组纯化的猪21、28、35、42、49、56、63、70、77、84天对4组试验猪瘟病毒液分别用紫外分光光度计检测杂蛋白去除耳静脉采血，分离血清，用猪瘟正向问接凝集诊断试剂盒测定猪瘟抗体。每组试验猪的抗体效价均以各收稿日期：2010—05—25自的几何平均值表示。基金项目：吉林省教育厅“十一五”科学技术研究项目(吉教科合2试验结果与分析字[2008]第245号)2．1杂蛋白去除率与无菌检验结

8、果I组的陶瓷作者简介：武桂梅(1966一)，女，实验师，本科，从事生物药物实验教学工作，E—mail：yaowul08@sohu．COm膜是0．80肚m，孔径最大，只有大分子杂蛋白被截留26‘中国兽医杂志2011年(第47卷)第7期除去，所以杂蛋白去除率较低，为63．19／6，浓缩除菌2．3纯化浓缩的猪瘟冻干活疫苗成品免疫抗体检收获量最多为10800mL；3