常用液相色谱柱原理.ppt

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1、常用液相色谱柱使用与保养SOP1.2液相色谱柱的结构及其主要功能液相色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝（封头）与柱填料等组成。柱管：多用不锈钢制成，若果使用时柱压不高于70kg/cm2时，也可采用厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很高的光洁度。用于柱填料的装填。压帽：即色谱柱两端套合于柱管端外壁的塑性圆柱帽，中部有小孔，多为聚四氟乙烯制成，用于固定筛板。密封环：位于接头螺旋环内壁的弹性环，多为聚四氟乙烯制成，用于色谱柱两端压帽与柱外壁的密封。1.3.5常用液相色谱柱主要应用范围与特点汇总1.3.5.1反相色谱柱柱填

2、料类型主要应用范围特点C18（ODS）可分离多种化合物，最适合用于极性样品或做离子抑制的样品的分析普适性好；保留性强，用途广；可用于正相。C8（辛基）与C18相似与C18相似，但保留值稍小C3，C4多用于肽类与蛋白质保留值更小C1[三甲基单氯硅烷(TMS)]普通反相溶剂分析疏水性强的化合物；使用高水含量溶剂分析高极性化合物；分离多功能团化合物保留值最小；最不稳定；可用于反相与正相苯基，苯乙基多用于分离分析同时含极性和非极性芳香化合物的混合物保留值适中；选择性有所不同，对极性芳香化合物选择性更强；可用于正相。1.3.5.2正相色谱柱柱填料

3、类型主要应用范围特点CN（氰基）适用于在ODS上无保留或分离时间太长的组分的分离，以及样品中同时含有亲水与疏水性化合物而在ODS上色谱优化困难的场合，也可用于氨基酸分析。属中等级性柱，普适性好；保留适中，可用于正相与反相。NH2（氨基）主要用于分析单糖类、烃类化合物保留性弱；极性大，不稳定，酸性条件下易水解；亦可用于反相。OH（二醇基，DIOL）多用于有机酸、肽类与蛋白质分析极性大于CN，小于NH2，常做HILIC用。可反相用。高纯硅胶柱多用于制备LC，适用于多种化合物普适性好；价廉；操作不太方便；pH窄（2-7.5）；次级保留效应强（

4、硅羟基），易峰拖尾或前延，分叉等。1.3.5.3聚合物基质柱（eg.聚苯乙烯柱）单独的聚苯乙烯类填料柱主要用于分离蛋白质类等大分子化合物，多用于GPC、GFC、MEC等；若与离子交换基团共键则形成离子交换柱，用于分离酸性化合物（磺酸基团）、碱性合物（季铵基团）及药物代谢产物等。特点：在1＜PH＜13的流动相中稳定；分离峰形较好，柱子寿命较长。1.3.5.4其他无机物填料柱如氧化铝、石墨化碳、氧化锆、硅藻土等，主要作制备色谱用。柱填料类型主要应用范围特点Chiral（手性柱）常用于分离手性异构体，根据分离不同机理选择。不同化学性质的异构体

5、需采用不同类型的手性柱。部分亦可用于反相。HILIC（亲水作用柱）最常用Diol柱、丙基酰胺基键合硅胶柱，多用于分析极性化合物、端基异构体、如药物极性代谢产物、多肽、有机酸、糖类等。多用于ELSD检测，C18无保留化合物，毒品检查等。可用于反相。1.4液相色谱柱制备工艺简述不同品牌色谱柱制备工艺各异，但都可归纳为如下流程（以硅胶柱为例）：硅烷化硅胶制备（四乙氧基硅烷脱乙基与聚合）→Si-OH基暴露（脱乙基，置换成H）→海绵状多孔硅胶构造（物理匀质过程）→官能团键合（各种官能团与Si-OH键合）→端基封口（对残余的Si-OH用小分子的氯-

6、甲基、氯-乙基键合）→润湿混合（加乙醇等调匀，其配方各厂家均有专利保护）→装填（机械装填或手工装填，层层装填，压紧，润湿）→高压平衡（轴向加压或径向加压，各厂家均有专利保护）→干燥（此步为关键工艺步骤，各厂家均有专利保护）→削平→组件安装→预平衡→柱效测试流动相平衡→柱效测试→封口→包装1.5液相色谱柱分离机理概述色谱柱类型分离机理备注常规反相柱相似相溶常规正相柱相似相溶离子交换柱样品离子与色谱柱离子达到置换动态平衡要关注pH条件手性柱（Chiralcolumn）氢键作用、偶级-偶级作用、π-π作用、静电作用、疏水作用、空间作用一般，A

7、GP、HSA、BSA等以疏水作用、空间作用为主。亲水性色谱柱（HILIC）氢键作用、偶极作用和静电作用等多种次级效应及相似相溶基于NP原理氨基酸分析柱相似相溶基于RP原理2、常用液相色谱柱使用方法与维护保养(1)认识色谱柱规范化使用与保养的必要性：延长色谱柱使用寿命，降低色谱柱使用成本，逐步提高分析人员色谱柱使用与维护水平，确保试验数据的准确性、可靠性和重现性，提升个人在色谱领域的竞争力。(2)熟悉几个概念：液相色谱柱：指用于液相色谱分离的柱形固定相，由柱管、压帽/卡套、筛板（滤片）、填料、接头等组合而成，可用于液相色谱分析与制备。色谱

8、柱再生：指色谱柱在非正常情况下，针对异常现象及原因采取的一系列修复补救措施，以提高色谱柱柱效和延长其使用寿命的处理过程。运载溶剂（ShippingSolvent）：指色谱柱生产厂商在柱出厂测试合格后饱和于色