花生根全长cDNA文库的构建及分析.pdf

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1、中国油料作物学报２０１４，３６（５）：６５３－６６０ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＯｉｌＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅｓｄｏｉ：１０．７５０５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－９０８４．２０１４．０５．０１５花生根全长ｃＤＮＡ文库的构建及分析１１１１１，２１陈华，张冲，蔡铁城，邓烨，郑奕雄，庄伟建（１．福建省作物分子与细胞生物学重点实验室，福建福州，３５０００２；２．仲恺农业工程学院，广东广州，５１０２２５）摘要：以闽花６号为材料，利用ＳＭＡＲＴ技术成功构建了花生根全长ｃＤＮＡ文库。原始文库滴度为１．３×６１０ｃｆｕ／ｍＬ，重组率达９

2、５．８％，插入片段大小为７５０～２０００ｂｐ，符合全长ｃＤＮＡ文库的质量标准。随机挑选３５个单克隆进行双向测序，共获得３０条有效序列。通过与ＮＣＢＩ非冗余蛋白质数据库进行比对和注释，获得已知功能基因或具推测功能的基因１５个，未知功能基因７个，新基因１３个，其中３４个（９７．１％）基因为花生未报道的基因。因此，该文库的构建为克隆和研究花生根部重要表达基因、从分子水平上揭示花生根的生长发育规律提供了基础。关键词：花生；ＳＭＡＲＴ技术；全长ｃＤＮＡ文库；根中图分类号：Ｓ５６５．２０３文献标识码：Ａ文章编号：１００７－９０８４（２

3、０１４）０５－０６５３－０８Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆｒｏｏｔｓｆｕｌｌ－ｌｅｎｇｔｈｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙｏｆｐｅａｎｕｔ１１１１１，２１ＣＨＥＮＨｕａ，ＺＨＡＮＧＣｈｏｎｇ，ＣＡＩＴｉｅ－ｃｈｅｎｇ，ＤＥＮＧＹｅ，ＺＨＥＮＧＹｉ－ｘｉｏｎｇ，ＺＨＵＡＮＧＷｅｉ－ｊｉａｎ（１．ＦｕｊｉａｎＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＣｒｏｐＭｏｌｅｃｕｌａｒａｎｄＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ，Ｆｕｚｈｏｕ３５０００２，Ｃｈｉｎａ；２．ＺｈｏｎｇｋａｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ

4、ａｎｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０２２５，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＲｏｏｔｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙｏｆｐｅａｎｕｔｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｒｏｏｔｓｏｆＡｒａｃｈｉｓｈｙｐｏｇａｅａｃｖＭｉｎｈｕａ６ｕｓｉｎｇ６ＳＭＡＲＴｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．Ｔｈｅｏｒｉｇｉｎａｌｌｉｂｒａｒｙｈａｄａｔｉｔｅｒｏｆ１．３×１０ｃｆｕ／ｍＬ，ｏｆｗｈｉｃｈ９５．８％ｃｌｏｎｅｓｗｅｒｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔａｎｄｉｎｓｅｒｔｃＤＮＡｓｗｅｒｅｆｒｏｍ７５０ｂｐｔｏ２０００ｂｐ．３５ｃｌｏｎｅｓｆｒｏ

5、ｍｔｈｅｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙｗｅｒｅｓｅｑｕｅｎｃｅｄａｎｄ３０ｖａｌｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓｗｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ．２５ｋｎｏｗｎｏｒｈｙｐｏｔｈｅｎｔｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅｎｅｓ，７ｕｎｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｇｅｎｅｓａｎｄ１３ｎｏｖｅｌｇｅｎｅｗｅｒｅａｎｎｏｔａｔｅｄｂｙＢｌａｓｔｘｓｅａｒｃｈｅｓａｇａｉｎｓｔｔｈｅＮＣＢＩｎｏｎ－ｒｅｄｕｎｄａｎｔｐｒｏｔｅｉｎｄａｔａｂａｓｅ．Ａｍｏｎｇｔｈｅｓｅｇｅｎｅｓ，３４ｇｅｎｅｓ（９７．１％）ｈａｄｎｏｔｂｅｅｎｒｅｐｏｒｔｅｄｉｎｐｅａｎｕｔ．Ｔｈｅ

6、ｒｅｓｕｌｔｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｇｅｎｅｓｉｎｐｅａｎｕｔｒｏｏｔｒｅｐｏｒｔｅｄｏｎｌｉｎｅａｔｐｒｅｓｅｎｔｗｅｒｅｓｔｉｌｌｒａｒｅ．ＴｈｅｆｕｌｌｌｅｎｇｔｈｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙｏｆｐｅａｎｕｔｒｏｏｔｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙｗｏｕｌｄｂｅｂｅｎｅｆｉｃｉａｌｔｏｍｉｎｅｉｍｐｏｒｔａｎｔｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅｎｅｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｐｅａｎｕｔｒｏｏｔｓａｎｄｓｕｐｐｌｙｂａｓｉｓｔｏｓｔｕｄｙｏｎｔｈｅｇｒｏｗｔｈａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｐｅａｎｕ

7、ｔｒｏｏｔｓｆｒｏｍｍｏｌｅｃｕｌａｒｌｅｖｅｌ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｅａｎｕｔ；ＳＭＡＲＴｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｆｕｌｌ－ｌｅｎｇｔｈｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙ；Ｒｏｏｔ根系是植物长期适应陆地生活的重要器官之花生白藜芦醇的研究已成为花生研究的热点之［３，４］一，可以从土壤中吸收水分和无机养分，并通过根的一。另外，花生根部是响应干旱胁迫的重要部［５］微管组织运输和转运到地上部，还可以将地上部合位，花生根部病害如根腐病、根结线虫病等也是［１］成的光合产物等有机物输送到根的各部位。花影响花生产量和品质的重要病害之一。然而，目前生是

8、我国重要的油料和经济作物，其根系属直根系，已知的花生功能基因基本集中在地上部分的转录由主根和多级侧根组成，是支撑、固定花生植株，吸本，在分离花生根部表达的功能基因及调控基因方收和输导水分、养分、合成某些氨基酸和激素的器面报道甚少。因此，构建花生根全长ｃＤＮＡ文库对官。具有抗菌、抗脂质过氧化以及降低固醇等