现代微生物技术检测技术.ppt

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1、现代微生物检测技术09级基地二班冯俊霞邹梓姣李梅香龙文英刘芬芳杨成志主要内容认识微生物微生物污染常用微生物检测技术新型微生物检测技术微生物检测的应用及实例认识微生物微生物：形体微小，结构简单的低等生物的统称。包括病毒、细菌、放线菌、真菌···特点：种类多分布广繁殖快适应性强易变异药品食品环境······食品据世界卫生组织估计，全世界每年有数以亿计的食源性疾病患者中，70%是由于各种致病性微生物污染导致的。我国每年发生的细菌性食物中毒事件占食物中毒事件总数的30%～90%，中毒人数占食物中毒总人数的60%～90%。药品据报道,1970年7月至1

2、971年3月,美国25家医院由于输注了细菌污染的葡萄糖致使378个患者得败血症,40人死亡。我国也在1991至1993年因人血白蛋白污染,输注发生了46例感染事件,死亡8例。环境肺结核、百日咳、流行性感冒等疾病的传播空气污染沙门氏杆菌病霍乱胃肠道疾病水体污染其他污染土壤化妆品航空燃料······如何及时、有效的检出微生物？常用的微生物检测技术1.常规的检测方法平板分离、镜检、生化试验等2.免疫学方法免疫荧光标记酶联免疫吸附实验（ELISA)自动酶标免疫检测仪3.分子生物学方法核酸探针PCR技术基因芯片技术4.联合检测方法:PCR-ELISA、

3、IMS-PCR等。5.物理学方法电阻抗技术、微热量计技术、放射测量技术生物传感器样品的采集样品的处理（分离、筛选）检验结果报告常规的微生物检测流程酶联免疫吸附试验(ELISA）底物显色定性或定量的分析原理:包被反应加入待测抗体或抗原和酶标抗原或抗体洗涤使结合在固相上的抗原抗体复合物与未结合的分离1234缺点：该技术的操作技巧性较强交叉反应比较严重、假阳性多该法检测限较高优点：灵敏、特异、快速、稳定以及易于自动化操作PCR技术PCR技术在微生物检测上的原理：利用某一特定微生物特有的基因序列，设计特异性引物进行PCR扩增。若有条带，则说明待测样品

4、中含有目的菌，且目的菌的含量与条带的亮度呈正相关；若无条带，则说明待测样品中无目的菌。缺点：食品中某些物质会干扰Taq聚合酶的作用。只能检测微生物的存在，微生物产生的毒素则不能检测出来假阳性或假阴性结果的出现。优点：特异性强灵敏度高速度快简便、高效PCR技术以其自身这些优势作为食源性致病微生物检测的关健技术在食品中得到广泛的应用准确、高灵敏度自动化检测快速检测操作简单改进质量难控费时费力易发生主观片面错误过程繁琐传统方法新型方法新型微生物检测技术胶体金免疫层析检测条技术微生物实时荧光光电检测技术环介导等温扩增技术（不讲）ATP荧光法快速检测技

5、术胶体金免疫层析检测条技术衬板样品垫金标垫吸收垫NC膜胶体金是氯金酸(HAuCl4)在还原剂作用下，聚合成一定大小的金颗粒，由于静电相斥作用而成为稳定的胶体状态，胶体金颗粒对蛋白有很强的吸附作用。以乙肝病毒的检测为例固定特异性抗体（乙肝表面抗体）乙肝表面抗原与胶体金结合胶体金标记复合物常见的胶体金免疫层析检测条大肠杆菌O157李斯特氏菌沙门氏菌特点：定性检测死菌和活菌、病毒，相对ELISA来说结果直观、准确、快速，且无需专门的检测仪器。该法被认为是微生物和传染病诊断技术标准化最有前途的新技术之一。原理：根据萤火虫发光原理，在有氧的条件下，虫光

6、素酶催化D-荧光素和ATP之间发生氧化反应，形成氧化荧光素并发出荧光，其生化反应式如下：ATP＋D-荧光素＋O2————>AMP＋氧化荧光素＋PPi＋CO2＋荧光Mg2+虫光素酶ATP荧光法快速检测虫光素酶D—荧光素ATP的数量↑在均过量的情况下：荧光强度↑测量相对荧光值微生物总数量那么常见的荧光检测仪ATP荧光法检测微生物特点：可实现精准、稳定、快速检测微生物总数的需求，但设备比较昂贵，对仪器的清洗保养要求特别高。检测时需做预处理，去除胞外游离ATP。保温2天，检测30分钟单个样品检测（5min)96个样品检测检测仪器可同时放32个检测管、

7、同温检测一次性检测管基于Windows系统的分析软件一台计算机可控制32台检测仪、软件自动将仪器中收集到的数据换算成CFU浓度，对不合格样本提出预警计算机以不同形式的报告进行自动存档和处理Biolumix微生物实时荧光光电检测系统一次性检测管黄色和蓝色两种LED灯检测区荧光管过滤膜孵育区CO2传感器两个基本技术：1.膜技术2.CO2传感器可将样本和微生物所在的孵育区与检测区分开，保持检测区的清澈，同步检测到颜色和荧光的变化，具有重要的防干扰能力。通过在一次性检测管底部嵌入一个透明的CO2固体传感器来检测微生物生长过程中所释放的CO2。当有CO

8、2进入时传感器会变色。只有气体可以穿透这个传感器，而液体、微生物和固体颗粒不能通过，从而避免了其它因素的干扰。微生物检测技术的应用及其实例医学检测食品检测环境检测C