补肾抗衰片干预动脉粥样硬化的氧化应激机制研究.pdf

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1、2014第十六卷第五期★vo1．16No．5补。抗衰片干预动脉粥样硬化的氧化应激机制研究六张光银．，李明，许颖智，彭立，杨萃，周亚男，马惠宁，张军平★★(天津中医药大学第一附属医院天津300193)摘要：目的：探讨补肾抗衰片对家兔动脉粥样硬化病变后血红素加氧酶一1(HO一1)mRNA及其相关氧化应激水平的影响。方法：将56只日本大耳白兔随机分为正常组8只，实验组48只，正常组给予普通饲料，实验组建立动脉粥样硬化模型，在第8周时，实验组随机分为模型组、补肾抗衰片组和辛伐他汀组。各组分别于给药前、给药后8、12、l6周采血，最后一次采血后处死动物，无菌条件下取主动脉，用Q—PCR法检测主动脉H

2、O—lmRNA、PPARcxmRNA的表达，免疫荧光技术检测HO—l蛋白水平，ELISA法检测血清HbCO、COX一2活性以及cGMP水平。结果：补肾抗衰片干预后，血清HbCO水平下降，cGMP明显升高，而COX一2活性无明显变化；HO一1免疫荧光检测发现，补肾抗衰组和辛伐他汀组绿色荧光区域均明显增加；主动脉HO一1mRNA基因在正常组仅有少量表达，动脉粥样硬化病变组HO一1mRNA表达增加，经补肾抗衰片干预后HO一1mRNA表达明显升高(P<0．05)，PPARamRNA经补肾抗衰片干预后各组无均有下降的趋势。辛伐他汀也存在类似的抗氧化效应。结论：中药复方制剂补肾抗衰片在动脉粥样硬化病变

3、中具有重要的抗氧化作用，其保护机制可能是通过调控HO—lmRNA基因的表达及影响HO一1／CO—cGMP通路中相关酶的活性，同时补肾抗衰片可能通过对抗过氧化反应稳定动脉粥样硬化斑块。关键词：补肾抗衰片氧化应激动脉粥样硬化H0—1mRNAdoi：10．11842／wst．2014．05．024中图分类号：R285．5文献标识码：A动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)的发病机制用⋯，然而BSKS抑制AS发生发展过程的机制尚未复杂，氧化应激机制是其中的一个中间环节，活性完全阐明。本实验观察BSKS对AS氧化应激作用的氧(ReactiveOxygenSpecies，ROS)过量生成

4、，就会对影响，从对血红素氧合酶一l(HaemOxygenase一1，机体造成氧化损伤。越来越多的证据表明氧化应激HO一1)及其对HO一1／CO—cGMP调控角度人手，探参与并促进AS的发生发展，在AS病程中发挥重要讨补肾抗衰片(BSKS)对AS的干预机制。作用。随着AS氧化应激机制研究的深入，抗氧化治1材料与方法疗在AS相关疾病的临床治疗中作用也逐步彰显。补肾抗衰片(Bu—shenKang—shuaniTablet，BSKS)立1．1实验材料法于“健脾益肾、涤痰散结”，临床应用广泛，对AS1．1．1动物病变疗效明确，对实验性AS也具有较好的治疗作普通级雄性日本大耳白兔56只(北京市维通利华

5、实验动物中心，许可证编号SCXK(京)2007—0001，防疫合格证号：20060038)，体质量(2．2±0．2)kg。收稿日期：2013—07—29修回日期：2013-08一O1国家自然科学基金委青年项目(30901905)：补肾抗衰片动态调控HO-1／CO与NOS／NO系统平衡稳定动脉粥样硬化斑块的实验研究，负责人：张光银。通讯作者：张军平，本刊编委，教授，主任医师，博士生导师，主要研究方向：中西医结合治疗心脑血管疾病的临床与科研工作。[0ScienceandTechnology／34odemizationofTraditionalChineseMedicineandMateriaM

6、edica]世界科学技术一中医药现代化★中医研究1．1．2试药致免疫炎症损伤，见图1。在免疫损伤1周后进行球补肾抗衰片(天津中医药大学第一附属医院制囊拉伤内皮损伤术。自第8周开始给药，给药16周剂，批号：071105)，由丹参、何首乌、夏枯草、茯苓、后，用3％戊巴比妥钠30mg·(mL·kg)麻醉，将动海藻、龟版、石菖蒲、砂仁、淫羊藿和桑寄生等组成；物固定于手术台，无菌条件下获取主动脉，生理盐辛伐他汀(Mecksharp&DohmeLtd．U．K生产，批号：水冲洗后，置于组织冻存管，液氮保存备用，其余新07283)；实时荧光定量(QuantitativePolymerase鲜组织置于一80

7、℃冰箱保存。ChainReaction，Q—PCR)试剂盒购于美国Invitrogen1．2．2分组与给药公司，批号：100008919；环氧合酶一2(Cyclooxyge—动物适应性喂养1周后，随机分成正常组8nase一2，COX一2)、一氧化碳血红素(Carboxyhe—只，实验组48只。自第8周时，实验组随机分为模moglobin，HbCO)和环磷酸鸟苷(CyclicGuanosine型组、补肾抗衰片组、辛伐他汀组