补肾方含药血清对人肝癌 SK-HEP-1 细胞增殖与凋亡的影响.pdf

《补肾方含药血清对人肝癌 SK-HEP-1 细胞增殖与凋亡的影响.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、上海中医药大学学报第28卷第3期2014年5月·63·补肾方含药血清对人肝癌SK—HEP一1细胞增殖与凋亡的影响刘宏杰陈建杰叶青艳商斌仪1．上海中医药大学附属曙光医院肿瘤科(上海201203)2．上海中医药大学附属曙光医院肝科(上海201203)【摘要】目的：评价补肾方含药血清对人肝癌细胞株SK—HEP一1细胞增殖和细胞凋亡的影响，探讨其作用机制。方法：用SD大鼠制备空白组、补肾组、索拉非尼组含药血清；培养并建立VEGF诱导的SK—HEP一1细胞模型，分别予药物血清干预。以MTr比色法检测各组对SK—HEP一1细胞增殖的影响，流

2、式细胞仪检测细胞周期与细胞凋亡，荧光Real—timePCR法检测细胞凋亡基因baxmRNA、bcl一2mRNA的表达。结果：与空白血清组和VEGF组比较，补肾组含药血清可明显抑制SK—HEP-1细胞增殖(P<0．O1)，提高SK-HEP一1细胞G，期的细胞比率(P<0．05)以及细胞的早期凋亡率(P<0．05)和总凋亡率(P<0．05)，上调baxmRNA基因表达(P<0．05)和下调bcl一2mRNA基因表达(P<0．01)，且补。肾组和索拉非尼组组间差异无统计学意义(P>0．05)。结论：补肾方对人肝癌细胞株SK—HEP一

3、1具有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用；其作用机制可能与阻滞细胞由G期进入s期和G期，以及上调bax和下调bcl一2基因表达，促进SK—HEP一1细胞的凋亡有关。【关键词】肝癌；补肾方；含药血清；细胞凋亡【中图分类号】R735．7；R285．5【文献标志码】A【文章编号】1008—861X(2014)03—0063—05肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，我国原0016。在清洁条件下常规饲养于上海中医药大学动发性肝癌的发病率已居世界第一，癌症病死率肝癌物实验中心。设施使用许可证号：SYXK(沪)2009—居第二，全球癌症杀手肝癌居

4、第三¨。肝癌的初0069。人肝癌细胞株SK—HEP-1，由中国科学院细胞期症状并不明显，晚期经常表现为乏力、口干、消库提供。瘦、肝区隐痛等肝肾阴虚之象，采用益气补肾法治1．1．2药物与试剂索拉非尼片，德国Bayer疗，可以改善症状，延缓复发和转移，提高患者的生Schefing公司生产(注册证号：H20090846)；补肾方活质量和延长生存期。本研究拟采用中药血清药由熟地黄、山茱萸、山药、补骨脂、杜仲、泽泻、丹皮、理学技术，评价补肾方对肝癌细胞增殖和凋亡的影茯苓组成，中药药材均由曙光医院中药房提供，经响，以期进一步探讨其可能的作用

5、机制。鉴定合格，水煎浓缩备用；AnnexinV-FITC／碘化丙锭(PI)试剂盒，购自天津三箭生物技术有限公司；1材料与方法血管内皮生长因子(VEGF)，购自美国PeproTech1．1实验材料公司。1．1．1动物与细胞sD大鼠，30只，雄性，7周龄，1．1．3仪器设备Bio．Hazard型超净工作台，造鑫体质量(250±20)g，购自上海西普尔一必凯实验动企业有限公司生产；CO细胞培养箱，德国Heraeus物有限公司。动物生产许可证号：SCXK(沪)2008一生产；FACSCalibur流式细胞仪，美国BectonDickin

6、son公司生产；Eco实时荧光定量PCR仪，美[基金项目]上海市领军人才计划基金项目；上海市卫生局国Illumina公司生产。中医药科研基金资助项目(2010QID11A)1．2动物分组与含药血清制备将30只SD大鼠[作者简介]刘宏杰，男，博士，主治医师，主要从事中医药适应性饲养10d，按随机数字表法随机分为3组，空防治肿瘤的临床与基础研究。白组、补肾组、索拉非尼组，每组各l0只。补’肾组灌[通讯作者]陈建杰，主任医师、教授，博士生导师。胃补肾方水煎剂(药物浓度为0．48g／m1)，索拉非E．mail：jianjie_ehen@

7、hotmail．con．64．ACTAUNIVERS1TATISTRADITIONISMEDICALISSINENS1SPHARMACOLOGIAEQUESHANGHAIVol28No3May，2014尼组灌胃索拉非尼混悬液(55mm1)，空白组灌胃3min；4℃14000r／rain离心15min，取上清液生理盐水。各组灌胃量均3mE／次，早晚各1次，共0．5mlJ3HAo．5ml异丙醇，混匀，22℃，静置10rain；3d。第4天清晨起断水断粮，取血清前1h再给予14000r／min离心10min，弃上清，加入1ml4℃一次

8、药物J。大鼠乙醚吸入麻醉后在无菌条件下75％乙醇；10000r／min离心5rain，弃上清，真空干剖腹，腹腔动脉抽血。采集完血液后在无菌条件燥5min，40lDEPC处理水溶解，一80~C保存。下，3000r／min离心10min，分离血清，0．2Ixm微孔P