生物质谱技术.doc

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1、生命科学被誉为21世纪的最前沿科学之一，随着人类第一张基因序列草图的完成和发展,生命科学的研究也将进入一个崭新的后基因组学，即蛋白质组学时代。正如基因草图的提前绘制得益于大规模全自动毛细管测序技术一样，后基因组研究也将会借助于现代生物质谱技术等得到迅猛发展。木文拟简述生物质谱技术及其在生命科学领域研究中的应用。1.质谱技术质谱（MassSPectrometry）是带电原了、分子或分了碎片按质荷比（或质量）的大小顺序排列的图谱。质谱仪是一类能使物质粒了高化成离了并通过适当的电场、磁场将它们按空间位置、时间先后或者轨道稳定与否实现质荷比分离，并检测强度后进行物质分析的仪器。质谱

2、仪主要由分析系统、电学系统和其空系统组成。质谱分析的基本原理用于分析的样品分子（或原子）在离子源中离化成具有不同质量的单电行分子离了和碎片离子，这些单电荷高了在加速电场中获得相同的动能并形成f离子，进入由电场和磁场组成的分析器，离子束中速度较慢的离子通过电场后偏转大，速度快的偏转小；在磁场中高子发生角速度矢量相反的偏转，即速度慢的高了依然偏转大，速度快的偏转小；当两个场的偏转作用彼此补偿时，它们的轨道便相交于一点。与此同时，在磁场中还能发生质量的分离，这样就使具有同一质荷比而速度不同的离了聚焦在同一点上，不同质荷比的离了聚焦在不同的点上，其焦面接近于平面，在此处用检测系统进

3、行检测即可得到不同质荷比的谱线，即质谱。通过质谱分析，我们可以获得分析样品的分子量、分子式、分了中同位素构成和分了结构等多方面的信息。质谱技术的发展质谱的开发历史要追溯到20世纪初J•J.Thomson创制的抛物线质谱装置，1919年Aston制成了第一台速度聚焦型质谱仪，成为了质谱发展史上的里程碑。最初的质谱仪主要用来测定元素或同位素的原了量，随着离了光学理论的发展，质谱仪不断改进，其应用范围也在不断扩大，到20世纪50年代后期已广泛地应用于无机化合物和有机化合物的测定。现今，质谱分析的足迹已遍布各个学科的技术领域，在固体物理、冶金、电子、航天、原了能、地球和宇宙化学、生

4、物化学及生命科学等领域均有着广阔的应用。质谱技术在生命科学领域的应用，更为质谱的发展注入了新的活力，形成了独特的生物质谱技术。2.生物质谱技术电喷雾质谱技术和基质辅助激光解吸附质谱技术是诞生于80年代末期的两项轨电离技术。这两项技术的出现使传统的主要用于小分了物质研究的质谱技术发生了革命性的变革。它们具有高灵敏度和高质量检测范围，使得在Pmo1(10—12)甚至fmo1(10—15)的水平上准确地分析分子量高达几万到几十万的生物大分子成为可能，从而使质谱技术真正走入了生命科学的研究领域，并得到迅速的发展。以下主要介绍与生物医学有关的几项质谱技术。电喷雾质谱技术电喷雾质谱技术

5、(ElectrospraylonizsationMassSpectrometry,ESI—MS)是在毛细管的出口处施加一高电压，所产生的高电场使从毛细管流出的液体雾化成细小的带电液滴,随着溶剂蒸发，液滴表面的电荷强度逐渐增大,最后液滴崩解为大量带一个或多个电荷的离了，致使分析物以单电荷或多电荷离了的形式进入气相。电喷雾离了化的特点是产生高电荷离了而不是碎片离了，使质量电荷比(m/z)降低到多数质量分析仪器都可以检测的范围，因而大大扩展了分了量的分析范围，离了的真实分了质量也可以根据质荷比及电行数算出。电喷雾质谱的优势就是它可以方便地与多种分离技术联合使用，如液一质联用(LC

6、-MS)是将液相色谱与质谱联合而达到检测大分了物质的目的。基质辅助激光解吸附质谱技术基质辅助激光解吸附质谱技术(MatriXAssistedLaserDesorption/IonizationMALDI)的基本原理是将分析物分散在基质分子中并形成晶体，当用激光照射晶体时，由于基质分了经辐射所吸收的能量，导致能量蓄积并迅速产热，从而使基质晶体升华，致使基质和分析物膨胀并进入气相。MALDAI所产生的质谱图多为单电荷离了，因而质谱图中的离了与多肽和蛋白质的质量有一一对应关系。MALDI产生的离子常用飞行时间(Time—of—FlightT0F)检测器来检测，理论上讲，只要飞行管

7、的长度足够，T0F检测器可检测分了的质量数是没有上限的,因此MALDI-TOF质谱很适合对蛋白质、多H太、核酸和多糖等生物大分子的研究。快原了轰击质谱技术快原子轰击质谱技术(FastAtomBomebard—mentMassSpectrometry,FABMS)是一种软电离技术，是用快速惰性原子射击存在于底物中的样品，使样品离了溅出进入分析器，这种软电离技术适于极性强、热不稳定的化合物的分析，更加适用于多肽和蛋白质等的分析研究。FABMS只能提供有关离子的精确质量，从而可以确定样品的元素组成和分子式。而FABMS-