抗CLCN5单克隆抗体的制备及鉴定.doc

《抗CLCN5单克隆抗体的制备及鉴定.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、抗CLCN5单克隆抗体的制备及鉴定［摘要］目的：制备抗氯离了通道蛋白5(CLCN5)单克隆抗体(mAb)并对其进行鉴定。方法：用人CLCN5为抗原免疫BLAB/c小鼠，用常规方法进行细胞融合，经筛选及克隆化建立可稳定分泌抗CLCN5mAb的杂交痛细胞株；用EL1SA及Westernblot进行抗体的鉴定。结果:筛选到4株可稳定分泌抗CLCN5mAb的细胞株；Westernblot显示,在4株抗体中有1株在相对分了量为83kDa处出现1条特异性条带，说明该单克隆抗体M与HSG胞浆蛋白中的CLCX5蛋白特异性地结合。结论：木实验成功获得1株可特异性识别CLCN5的单克隆抗体细胞株，可用于肾结石

2、、X-连锁综合征的进一步研究、临床诊断及相关试剂盒等的开发研制。［关键词］氯离子通道蛋白(CLCN5)；单克隆抗体；抗体鉴定；细胞融合［中图分类号］R392-33［文献标识码］A［文章编号］1673-7210(2008)01(a)-014-02Preparationandidentificationofthemonoclonalantibodiesagainstchloridechannel5CHENLi,SHTZhi-hua(TheThirdPeople"sHospitalofDalianCity,Dalian116000,China)［Abstract］Objective:Toprep

3、areandidentifymonoclonalantibodyagainstchloridechannel5(CLCN5).Methods:WepreparedhybridomacelllinessecretingCLCN5mAbfromimmunizedBALB/cmicewithantigenCLCN5,thenbycellfusion,screenedwithindirectELTSAandclonedwithlimiteddilutionmethods.ThepropertiesofantiserumagainstCLCN5werecharacterizedbyELISAandW

4、esternblot.Results:FourhybridomacelllinessecretingCLCN5mAbhadbeendeveloped,andtheELISAtitreofthemAbswasrespectivelydetected.AccordingtotheWesternblot,wecouldseethattheCLCN5proteinwashighlyexpressedwithamolecularweightof83kDa,itmcanedthatthemonoclonalantibodiesspeciallyrecognizedaproteinbandexpress

5、edinthehumansubmandibulargland(IISG)cellline.Conclusion:WegetsaCLCN5mAbwhichcanbespeciallyrecognizedbyCLCN5.Thesuccessfulgenerationmonoclonalantibodiesproteinwillprovideefficientaffinityreagentsforthefurtherfunctionalstudiesofclcn5geneexpressedinhumanbodyandit'srelationwithkidneystonedent'sdisease

6、andX~1inkeddisorder.［KeyWords］Chloridechannel5;Monoclonalantibody;Identificationoftheantibodies;Cellfusion觐离了通道(CLC)是迄今发现的唯一电压门控藐离了通道，在细胞兴奋性调节、细胞容积调节和跨上皮物质转运等生理过程的调节中发挥重要作用。氯离了通道蛋白5(chloridechannel5,CLCN5)是其众多分类中的一类，在核内体上参与肾脏细胞的胞饮作用，分子量为83.152kDa。氯离子通道蛋白基因5(clcn5)有13个外显子，位于X染色体短臂(Xpli.22),在肾脏、血管、胰

7、腺、胎盘中均有表达，但以肾脏为主。在西方国家，12%的男性和5%的女性被肾结石疾病困扰，45%的病人有家庭史，且通常与高钙尿相关，异常高钙尿性肾结石(DENT，S病)，X-连锁隐性肾结石(X-linkedrecessivenephrolithiasis,XRN),X-连锁隐性低磷性佝偻病(X-linkedrecessivehypophesphatemicnickets,XLRII)都在Xpll.22上表示，这个位置正是c