扣带回前部NMDA受体与睡眠剥夺模型大鼠外盾疼痛感受阈值的相关性研究.pdf

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1、实验研究扣带回前部NMDA受体与睡眠剥夺模型大鼠外周疼痛感受阈值的相关性研究杨宇刘畅杨雪z高久壹z张翠侠z苏道元z1．沈阳医学院生理学教研室，辽宁沈阳110034；2．沈阳医学院临床医学系2012级学生，辽宁沈阳110034【摘要】目的通过建立失眠大鼠模型观察外周疼痛感阈值及中枢痛觉扣带回前部谷氨酸受体(NMDA)表达水平。方法将80只成年雄性WISTAR大鼠随机分为对照组，睡眠剥夺24h组(A组)、睡眠剥夺48h组(B组)及睡眠剥夺72h组(c组)，每组各20只WISTAR大鼠，通过小平台环境法建立睡眠剥夺大鼠模型，采用Weat

2、embloting测定各组大鼠扣带回前部NR2A及NR2B蛋白表达水平，采用热敏测试仪测定各组大鼠足部热痛阈值变化。结果A组大鼠热刺激足潜伏期为(7．92~4．39)s与对照组(8．02+3．12)s相比无统计学差异(JD>O．05)，而B组、c组大鼠热刺激足潜伏期分别为(6．58~I．05)s和(5．12_+0．96)s，B、C组热刺激足潜伏期显著短于对照组及A组，差异有统计学意义(P<0．05)。B组、c组大鼠脑组织中NR2A、NR2B表达水平显著高于对照组及A组，差异有统计学意义(P

3、间的延长而显著下降，而脑皮质扣带回前部中NMRA受体及NR2B受体随剥夺时间的延长表达水平显著上调。【关键词】NMDA受体；睡眠剥夺大鼠；外周疼痛感受阈值【中图分类号】R740【文献标识码】A【文章编号】1672—5654(2014)04(c)一0028—02睡眠剥夺是指由于各种原因引起的睡眠缺乏导致机体疲劳睡眠时会由于肌肉紧张收缩而落入水中，同时在箱子中放置40W日及精神萎靡的症状。近年随着人们生活节奏改变及工作压力的增光灯持续照射。实验前先将大鼠放人箱子中圈养1周，让大鼠适大，使得大部分人长期处于疲劳及睡眠缺乏状态，导致近期睡

4、眠应新环境．防止环境应激性对大鼠产生影响。其中A组大鼠干预剥夺患者的比例不断增加lI。研究发现，长期处于睡眠剥夺状态的24h，B组大鼠干预48h，C组大鼠干预72h。对照组大鼠放在同样人们其容易出现多系统、多脏器损伤，导致机体出现各种疾病回。体积的箱子中圈养，但箱子中不灌注水。近年已有关于睡眠剥夺对神经中枢精神行为、认知能力相关影响1．3热刺激大鼠足部实验的研究，但关于睡眠剥夺对机体疼痛感功能的影响的作用机制目采用由成都泰盟科技有限公司提供的型号为PL-200热敏测前尚报道甚少翻。研究认为，中枢皮质扣带回前部是痛觉调控及试仪刺激大

5、鼠足部，将大鼠放在透明的塑料笼中适应30min，待感受的关键部位，NMDA是神经信号传递过程中的重要物质。因其安静后采用热敏测试仪照射大鼠足部，并记录每组大鼠足部收此，本研究于2013年1月一2013年12月将通过建立睡眠剥夺缩反应时间．即热刺激缩足潜伏时间。刺激时间为20s，每只大鼠测试时间间隔为45min，每只大鼠共测定3次取平均值。大鼠模型，刺激并检测大鼠足部痛阈，从而探讨睡眠剥夺对机体1．4Vc'estemNoting检测痛觉神经的影响，为临床防治疲劳应激引起的机体疼痛症状提供实验组大鼠睡眠剥夺后，采用300mg／kg水合

6、氯醛(厂家：郑相关理论依据。州优然食品化工有限公司，产品规格：25kg)将大鼠麻醉断头处1材料及方法死．将大鼠皮质扣带回前部取出，并将其置于匀浆器中搅拌，每份1．1动物及分组组织中加入2001xL细胞裂解液(厂家：南京森贝伽生物科技有限选取8O只Wistar成年健康雄性大鼠(由沈阳医学院实验动公司，型号规格：lO0mL，500mL)，并将匀浆搅拌放入EP管中静置物中心提供)，体重为(250~20)g，昼夜节律适应性饲养1周，室温30min．并在4℃环境中以1200r／min的速度离心处理15rain，留取控制在(25_+1)℃。随

7、机将大鼠分为正常组、睡眠剥夺24h组(A上清液。采用由美国Pierce公司提供BCA蛋白定量试剂盒测定组)、睡眠剥夺48h组(B组)及睡眠剥夺72h组(c组)，每组各20蛋白浓度。取40ug总蛋白进行SDS—PAGE电泳、转膜及封闭实只Wistar大鼠。验，并加入由博士德公司提供的NR2A及NR2B抗体进行孵育震1．2大鼠睡眠剥夺模型的建立荡过夜。次日将膜取出经TBS漂洗后加入美国Gel1signaling公采用小平台水环境法制作大鼠模型，按照相关文献制作30cm×司提供的羊抗兔二抗于室温下孵育lh，采用ECL发光法进行漂洗30c

8、mx30cm的箱子，往箱子中缓慢灌注水，水温为20℃，水面与染色。同时采用Image136b软件测定蛋白条带灰度值，蛋白相对平台距离为20cm,~台上放置食物及饮用水以供大鼠饮食。当大鼠表达量=目的蛋白灰度值／GAPDH灰度值。1．5统计学分析【作