分子生物学实验技术.pdf

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1、分子生物学实验技术目录实验一细菌的培养...........................................................................................................................2实验二质粒DNA的提取..............................................................................................................3实验三紫外吸收法测定核酸浓度与纯度..........

2、............................................................................4实验四水平式琼脂糖凝胶电泳法检测DNA.............................................................................5实验五质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定............................................................................7实验六植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析

3、......................................................................8实验七聚合酶链反应（PCR）技术体外扩增DNA...................................................................9实验八RNA提取与纯化.............................................................................................................11实验九RT-PC

4、R扩增目的基因cDNA.........................................................................................13实验十质粒载体和外源DNA的连接反应..................................................................................15实验十一感受态细胞的制备及转化.........................................................................

5、...............16实验十二克隆的筛选和快速鉴定................................................................................................18实验十三DNA分析——Southern杂交.......................................................................................19一基本操作实验一、细菌培养实验二、质粒DNA提取实验三、紫外吸收法测定核酸浓度与纯度实验四、水平式琼脂糖凝

6、胶电泳法检测DNA实验五、质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定实验六、植物基因组DNA提取、定量、酶切及电泳分析实验八、植物RNA提取及纯化二、目的基因获取实验七、聚合酶链式反应（PCR）技术体外扩增DNA实验九、RT-PCR扩增目的基因cDNA三、目的基因的克隆和表达实验十、质粒载体和外源DNA的连接反应实验十一、感受态细胞的制备及转化实验十二、克隆的筛选和快速鉴定实验十三、DNA分析——Southern杂交实验一细菌的培养一、目的学习细菌的培养方法及培养基的配置。二、原理在基因工程实验和分子生物学实验中，细菌是不可缺少的实验材料。质粒的保存、增殖和转化；基因文库的建立等都离不

7、开细菌。特别是常用的大肠杆菌。大肠杆菌是含有长约3000kb的环状染色体的棒状细胞。它能在仅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的无机盐的培养基上快速生长。当大肠杆菌在培养基中培养时，其开始裂殖前，先进入一个滞后期。然后进入对数生长期，以20~30min复制一代的速度增殖。最后，当培养基中的营养成分和氧耗尽或当培养基中废物的含量达到抑制细菌的快速生长的浓度时，菌体密度就达到一个比较恒定的值，这一时期叫做细菌生长的饱和期。此时菌体密度可达到1×109~2×109/mL。培养基可以是固体的培养基，