基因工程的基本操作程序1课件.ppt

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1、尝试回忆1.可以连接两种末端的DAN连接酶是？其连接哪种末端的效率比较低？2.限制酶的主要来源？作用部位是？3.限制酶作用结果4.限制酶的作用特点5.DNA连接酶的作用结果6.DNA连接酶的作用7.“分子运输车”具备的条件8.基因工程的基本操作程序主要包括哪四步9.质粒的定义（记忆）基因工程的基本操作程序基因操作的基本步骤基因工程的基本操作程序（1）目的基因的获取（2）（3）将目的基因导入受体细胞（4）目的基因的检测与鉴定基因表达载体的构建一、目的基因的获取1、目的基因：主要指的是编码蛋白质的结构基因，也可以是一些具有调控作用的因子。2、获取方法：（1）从基因文库中

2、获取目的基因；（2）利用PCR技术扩增目的基因；（3）通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成（一）从基因文库中获取目的基因1.什么叫基因文库？将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。基因文库基因组文库部分基因文库（cDNA文库）基因组DNA文库cDNA文库基因组DNA文库与cDNA文库的比较补：原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游与RNA聚合酶结合位点启动子终止子RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并以DNA分

3、子的一条链为模板合成RNA。转录完毕后，RNA链释放出来，紧接着RNA聚合酶也从DNA模板链上脱落下来。①不能转录为信使RNA，不能编码蛋白质。：能转录相应的信使RNA，能编码蛋白质编码区非编码区原核细胞的基因结构②有调控遗传信息表达的核苷酸序列，在该序列中，最重要的是位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点。非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游启动子终止子补：真核细胞的基因结构编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点内含子外显子能够编码蛋白质的序列叫做外显子不能够编码蛋白质的序列叫做内含子启动子终止子编码区上游编码区下游内含子：外显子：真核细胞的基因结构编码

4、区非编码区外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列：有调控作用的核苷酸序列，包括位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点。非编码序列：包括非编码区和内含子课前背诵1.目的基因的定义？（两句话）2.基因文库，部分基因文库定义?以及P10表格3.获取目的基因的依据（5条）获取目的基因的常用方法？4.原核生物基因结构？真核生物基因结构？4.PCR全称？定义？原理？5.PCR技术的前提条件？扩增过程？结果？6.基因工程的基本操作程序？（四大步）1.DNA连接酶的作用2.DNA连接酶的作用结果3.基因中具有启动子的基因文库是4.物种间的基因可以交流的基因文库是5.P

5、CR技术的全称？原理是？前提是？6.基因工程的核心是？7.基因表达载体的组成8.将目的基因导入植物细胞的方法？动物细胞？9.检测目的基因是否导入受体细胞的方法是？是否转录的方法？是否翻译的方法？10.标记基因的作用附：标记基因的筛选原理前提：载体上的标记基因一般是一些抗生素的抗性基因。目的基因要转入的受体细胞没有抵抗相关抗生素的能力。过程：含有某抗生素抗性基因的载体导入受体细胞，抗性基因在受体细胞内表达，受体细胞对该抗生素产生抗性，然后在培养基中加入该抗生素。结果：在培养基上，被抗生素杀死的是没有抗性的受体细胞，没被杀死的具有抗性的受体细胞得以筛选。阅读课本P8-1

6、5，自主探究以下问题1.PCR技术的名称概念原理前提过程目的2.基因表达载体的构建的目的组成及各组成的作用（启动子终止子标记基因）重点3.将目的基因导入植物细胞的方法4.转化的概念5.农杆菌的特点6.将目的基因导入动物细胞的方法（附：受体细胞通常是受精卵，因为受精卵具有全能性，可使外源基因在相应组织细胞中得到表达）7.原核生物的特点8.检测目的基因是否导入的方法？是否转录的方法？是否翻译的方法？9.基因探针的概念（放射性同位素等标记的含有目的基因的单链DNA片段）原核细胞真核细胞不同点编码区是_____的编码区是间隔的、_____的相同点都由能够编码蛋白质的____

7、__和具有调控作用的______区组成的原核细胞与真核细胞的基因结构比较思考编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？连续不连续编码区非编码基因组文库和部分基因文库的比较文库类型cDNA文库基因组文库文库大小基因中启动子基因中内含子基因多少物种间基因交流小大无有无有某种生物的部分基因某种生物的全部基因可以部分基因可以思考：如何从基因文库中得到所需要的基因？依据：目的基因的有关信息。如：根据基因的核苷酸序列；基因的功能；基因在染色体上的位置；基因的转录产物mRNA；基因翻译产物蛋白质等特性。注意：基因文库中不是直接保管相应基因，而是保存受体菌