量子点银增强可视化检测方法的研究与应用.pdf

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究快报第10期2010年10月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1383～l387DOI：10．3724／SP．J．1096．2010．01383量子点银增强可视化检测方法的研究与应用许国峰李慧张翠孙子因钟文英许丹科陈洪渊(中国药科大学分析化学教研室，南京210009)(南京大学化学化工学院，南京210093)摘要通过制备链霉亲和素修饰的CdTe量子点探针，建立了基于量子点探针的银增强显色可视化检测方法，并结合蛋白质芯片分析

2、技术，将此方法应用于反相蛋白芯片的分析检测。以人IgG测定为模式，在醛基片上固定人IgG，an．z,10ngBio一羊抗人IgG及CdTe—SA探针，银增强显色15min。结果显示，人IgG样品量在100Pg—t．6ng范围内，其对数值与信号灰度值呈良好的线性关系(r=0．997)，检出限为50Pg。本方法可实现微量蛋白的灵敏检测，具有操作简单，对仪器要求低，结果可视化等特点。关键词量子点探针；银增强显色；可视化；蛋白芯片1引言近年来，随着纳米技术的飞速发展，量子点作为一种新兴的纳米材料，因其具有优良、

3、独特的光电性质在诸多领域，尤以生命科学为代表，发挥着越来越大的作用J。目前，量子点更多的是依据其具有激发光谱宽且连续分布，发射光谱窄而对称，抗光漂白能力强等特点而作为荧光探针标记生物体系应用于药物筛选、荧光编码、细胞示踪、生物成像等。量子点作为一种三维尺寸在纳米级别(1—100nm)的半导体纳米晶，因其颗粒粒径小，比表面积大，表面具有的活性位点多，结合其本身量子点半导体纳米晶的组成的元素，存在诸如纳米金、纳米银类似的作为电子传递载体，在还原剂(如对苯二酚)存在下可催化Ag还原成单质V沉积于表面的催化潜力

4、。Chou等在观测组织内量子点的分布情况时应用量子点的催化特性，通过组织切片银增强染色肉眼可视方法直接定性观测了CdSe／ZnS量子点在各组织内的分布。同时与荧光成像方法相比较，银染方法更能准确定位量子点的分布情况，不受生物体内荧光猝灭因素影响，方法快速、直观、简便。本实验通过合成CdTe量子点并制备链霉亲和素修饰的CdTe量子点探针，利用CdTe量子点催化Ag还原成单质如沉积于量子点周围，形成黑色肉眼可见的颗粒，结合蛋白质芯片分析技术平台，建立了一种基于量子点银增强显色的可视化检测新方法。2实验部分2

5、．1仪器与试剂晶芯SmartArrayer48微阵列芯片点样仪(博奥生物有限公司)；ScanMakeri900CCD芯片扫描仪(上海中晶科技有限公司)；JEM．200CX透射电镜(Et本JEM公司)；RF-5301荧光分光光度计、uV．Vis2100紫外可见分光光度计(日本岛津公司)；PHS．3C型酸度计(上海雷磁仪器厂)；BS一124S电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；CT15RT台式高速冷冻离心机(上海天美科学仪器有限公司)；ZD一85气浴恒温振荡器(常州国华电器有限公司)。醛基化玻片(美国

6、CELAssociates公司)；牛血清白蛋白(BSA，南京布克生物技术有限公司)；链霉亲和素(SA)、人IgG、Bio-羊抗人IgG(北京博奥森生物技术有限公司)；银增强试剂A、B液(美国Sigma2010-06-07收稿；2010-06-27接受本文系国家自然科学基金(Nos．20975050，20575079)，973项目子课题(No．2006CB910803)，蛋白质组学国家重点实验室开放课题．江苏省“六大人才高峰”和中国药科大学研究生专项经费(No．JKY20009063)项目资助{E—mai

7、l：wenyingzhongnj@163．con：xudanke@126．com1384分析化学第38卷公司)；巯基乙酸TGA(分析纯，上海凌峰化学试剂有限公司)；CdC1·2．5HO(分析纯，纯度>96％。上海金山亭新化工试剂厂)；碲粉(纯度99．9％，国药集团化学试剂有限公司)，缩合剂碳二亚胺EDC、Ⅳ．羟基硫代琥珀酰亚胺NHS(阿拉丁试剂(中国)有限公司)；其它试剂均为国产分析纯，实验用水为二次蒸馏水。2．2实验方法2．2．1TGA修饰的CdTe量子点的合成改进文献[8，9]方法，将47mgTe粉

8、和50mgNaBH加入密闭反应瓶中，加人3mL无水乙醇和1mL超纯水，控制水浴温度40℃，磁力搅拌反应至Te粉完全消失，体系为氮气保护的无氧环境。反应结束后，用冰浴冷却10min。用1mol／LNaOH调节含有巯基乙酸的CdC12溶液(Cd-SR)至pH8．0，然后在剧烈搅拌下加入新制得的NaHTe前驱液(Cd2、Te与TGA的摩尔比为1：O．5：2．4)，搅拌反应20min，初始得到亮黄色透明胶体溶液，100℃回流10h得到CdTe量子点