Western Blot结果条带分析.doc

《Western Blot结果条带分析.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、WesternBlot结果条带全面分析1.空白原因：比较多，如果单纯一张没有任何显色，最可能是一抗加成其他抗体，或者二抗种属加错了，比如兔的加成鼠的。解决办法：仔细检查抗体是否加错，确认转膜没有问题。上面的图片展示的是一点信号都没有，如果是这样大部分情况是抗体加错了。如果中间出现了细微的条带，可能原因是蛋白上样量太少，一抗浓度过低，显色液失效。另外如果转膜出现了问题，比如膜放反了，自然是一个白片。2.高背景原因：封闭不够好，一抗浓度高，洗膜时间和次数不够。解决办法：降低一抗浓度，增加洗膜时间和次数

2、。3.非特异性条带原因：一抗非特异性与蛋白结合解决办法：更换一抗4.条带中出现边缘规则的白圈原因：电转中膜和胶之间存在气泡。解决办法：转膜前去掉膜和胶之间的气泡 5.出现黑点和黑斑原因：膜上其他部位与一抗或者二抗非特异性结合解决办法：封闭结束之后要洗。6.条带拖尾原因：蛋白量太大，一抗浓度和时间太长解决办法：根据情况调整蛋白量，同时一抗浓度和时间也可以缩短。7. 出现非均一性背景原因：膜可能曾经干过解决办法：在每一步的操作过程中，都需要注意不要让膜干。 8.某个条带变形原因：SDSPAGE胶中存在

3、气泡或者某不溶性颗粒解决办法：配胶过程中要小心，使用无杂质的液体。另外配胶用的水，SDS，Tris缓冲液要注意不要有杂质。9.条带呈哑铃状原因：配置胶有问题，胶凝固后不均一解决办法：把胶配好，不合格的胶坚决不用10.最边缘条带弯曲原因：电泳电流不均一解决办法：换用新的电泳槽；不使用两边的两孔其他问题（1）蛋白分子量偏高或者偏低。可能是胶的浓度与目的蛋白的浓度不对应。（2）蛋白质降解。蛋白质降解后很可能会在比原来位置低的地方出现主带，然后会出现一些其他带，最主要特点是所有的条带比正常的都低，并且条带

4、模糊不清晰。（3）所有条带连成一片没有间隔。原因最可能是上样量过多，其次是样品弥散（比如电泳长时间停止样品弥散）。（4）整个条带呈“︶”状：凝胶冷却不均一，电泳槽老化。（5）整个条带呈“︵”：凝胶左右两头没有凝固好（6）溴酚蓝拖尾：样品溶解不好。（7）纵向的纹理：上样样品中存在不溶性颗粒（8）溴酚蓝很粗：浓缩胶浓缩效果不好，可能是浓缩胶太短，或者是浓缩胶配错。（9）在分离胶中跑不动：Tris-HClPH值不对，或者忘记加SDS。